Cell Navigator 线粒体标记试剂盒 橙色荧光

简要概述

        Cell Navigator 线粒体标记试剂盒是一套荧光成像工具，用于标记细胞器细胞器，如膜，溶酶体，线粒体和细胞核等。活细胞线粒体的选择性标记为研究细胞事件提供了一种强有力的方法。这个特定的试剂盒旨在标记蓝色荧光的活细胞线粒体。该试剂盒使用专有染料，可根据线粒体膜电位梯度选择性累积在线粒体中。线粒体指示剂是一种疏水性化合物，可以很容易地渗透完整的活细胞，并在进入细胞后被困在线粒体中。该荧光线粒体指示剂长时间保留在线粒体中，因为该指示剂携带细胞保留组。这一关键特征显着提高了染色效率。标签协议是健壮的，需要动手时间。它可以很容易地适用于各种荧光平台，如微孔板分析，免疫细胞化学和流式细胞术。它适用于多种研究，包括细胞粘附，趋化性，多药耐药性，细胞活力，细胞凋亡和细胞毒性。该试剂盒为所有重要组分提供了优化的细胞标记方案。它适用于增殖和非增殖细胞，可用于悬浮细胞和贴壁细胞。Cell Navigator 线粒体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。

产品说明书

样品分析

1.准备线粒体染色溶液：

1.1将所有组件温度调至室温。

1.2通过将20μLMitolite Orange（组分A）稀释到10mL活细胞染色缓冲液（组分B）中制备染料工作溶液。

注1：对于一个96孔板，20μL的500X Mitolite Orange（组分A）就足够了。在≤-20ºC下等分并储存未使用的500X Mitolite Orange。避光，避免反复冻融循环。

注2：荧光线粒体指示剂的浓度根据具体应用而变化。可以根据特定细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来修改染色条件。

2.准备和染色细胞：

2.1对于粘附细胞：在96孔黑色墙壁/透明底板上或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上培养细胞。当细胞达到所需的汇合时，加入等体积（例如对于96孔板为100μL，对于384孔板为25μL）的染料加工溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37ºC，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。用Hanks和20mM Hepes缓冲液（HH缓冲液）或您选择的缓冲液（例如浓度为1：1的生长培养基缓冲液）替换染料上样溶液。

注意：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。

2.2对于悬浮细胞：以1000rpm离心细胞5分钟以获得细胞沉淀并吸出上清液。在预热（37℃）生长培养基中轻轻重悬细胞沉淀，并加入等体积的染料加工溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37ºC，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。用Hanks和20mM Hepes缓冲液（HH缓冲液）或您选择的缓冲液（例如浓度为1：1的生长培养基缓冲液）替换染料上样溶液。

注1：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或培养时间以使染料积累。

注2：悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）处理过的盖玻片上，并作为粘附细胞染色（见步骤2.1）。

Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 深红色荧光

简要概述

        Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 深红色荧光 是一套荧光成像工具，用于标记亚细胞细胞器，如膜，溶酶体，线粒体，细胞核等。该试剂盒使用专有的溶解性染料，可以通过溶酶体pH梯度选择性地积聚在溶酶体中，该指示剂的溶质是一种疏水性化合物，很容易渗透完整的活细胞，并被保留在溶酶体内，进入溶酶体后，其荧光显着增强，这一关键特征显着降低了其染色背景。适用于多种不同类型的研究中包括细胞粘附、趋化性、多药耐药性、细胞活力，细胞凋亡和细胞毒性。该试剂盒提供所有的必需组分和细胞标记方法，适用于增殖和非增殖细胞，可用于悬浮细胞和贴壁细胞。LysoBrite染料的性能明显优于同等的LysoTracker染料（来自Invitrogen）。LysoBrite染料可以在活细胞中停留一周以上，对细胞的毒性极小，而LysoTracker染料只能使用几个小时，LysoBrite染料可以存活几代细胞。此外，LysoBrite染料比LysoTracker染料具有更高的光稳定性，金畔生物是为您提供优质的Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒。Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 深红色荧光 是美国AAT Bioquest研发的产品。

适用仪器

产品说明书

试验方案

1. 准备细胞

2. 添加LysoBriteDeep Red染料工作溶液

3. 在37°C孵育30分钟至60分钟

4. 添加染色缓冲液

5. 室温孵育30分钟

6. 在荧光显微镜下Ex/Em =590/620nm（Texas Red滤光片组）处进行分析

注意：1）实验前，取出试剂盒进行室温冻结。

样品示例及使用方法

1.准备溶酶体染色溶液：

1.1  取出试剂盒中A、B、C组分，室温避光静置5-10min。

1.2  移取10μL LysoBrite Deep Red（组分A），用5mL细胞染色缓冲液（组分B）进行稀释，制备染料工作液。

注意：1) 10μL的500X LysoBrite Deep Red（组分A）足够完成一个96孔板，根据要求分装并储存未使用的500X LysoBrite Deep Red（组分A），避免反复冻融。

2)荧光溶酶体指示剂的浓度根据实际应用而改变，可以根据探针的渗透性对细胞类型、细胞或组织的染色条件进行调整。

2.细胞染色：

• 对于贴壁细胞：

在96孔黑色墙壁/透明底板（50μL/孔/ 96孔板）或装有适当培养基内的培养皿的盖玻片上培养细胞，当细胞达到所需的汇合时，在96孔板或培养皿内加入1/2的LysoBrite Deep Red工作液，在37℃、5％CO₂条件下培养箱中孵育30分钟至60分钟，将(50 µL /孔/96孔板）的染色缓冲液B（组分C）加入LysoBrite Deep Red工作溶液板中，在室温下孵育15-30分钟。再使用配有Texas Red 滤片组的荧光显微镜观察细胞，使之带深红色荧光(Ex/Em = 590/620 nm)。

注意：1）LysoBrite Deep Red对细胞的毒性很小或没有，它可以用于细胞跟踪。为了进行细胞跟踪，可跳过添加染色缓冲液B的步骤，只需将染料工作液替换为生长培养基，然后在荧光显微镜下观察即可。如果细胞看起来没有充分染色，建议适当增加染料浓度或孵育时间。

• 对于悬浮细胞：

在1000rpm条件下离心培养液5分钟，得到细胞沉淀并弃去上清液，在预热（37℃）生长培养基例如（100 µL /管）中轻轻重悬细胞沉淀，然后添加1/2体积（50 µL /管）LysoBrite Deep Red工作溶液。在37℃、5％CO2条件下培养箱中孵育30分钟至60分钟，将(50 µL /孔/96孔板）的染色缓冲液B（组分C）加入LysoBrite Deep Red工作溶液板中,在室温下孵育15-30分钟。再使用配有Texas Red 滤片组的荧光显微镜观察细胞，使之带深红色荧光(Ex/Em = 590/620 nm)。

注意:  1）LysoBrite Deep Red对细胞的毒性很小或没有。它可以用于细胞跟踪。为了进行细胞跟踪，可跳过添加染色缓冲液B的步骤，只需将染料工作液替换为生长培养基，然后在荧光显微镜下观察即可。如果细胞看起来没有充分染色，建议适当增加染料浓度或孵育时间。 

        2）悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）处理过的盖玻片上，并作为贴壁细胞染色。

示例数据分析及图示

图一：在Costar黑色透明底96孔板中用Cell Navigator 溶酶体染色试剂盒LysoBrite Deep Red染色Hela细胞的荧光成像结果。

图二：HeLa细胞分别用A和B，置于Costar黑壁/透明底96孔板中染色后的荧光成像结果，在0秒和120秒的曝光时间下，使用Olympus荧光显微镜对信号进行比较。 A: Cell Navigator溶酶体染色试剂盒(Cat# 22659)、B: LysoTracker®Red DND-99(来自Invitrogen公司)。

Cell Navigator 荧光法脂滴检测分析试剂盒 绿色荧光

简要概述

        Cell Navigator 荧光法脂滴检测分析试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于脂滴检测的试剂盒，脂质液滴，也称为脂质体，油体或脂肪体，是富含脂质的细胞器，可调节中性脂质的储存和水解。它们还充当许多重要生物过程（如脂肪酸和细胞胆固醇）的脂质来源的贮藏库，以促进能量，膜的形成和维持。细胞质脂质滴的异常积累发生在多种病理状况中，并且可以指示代谢缺陷或发病机理。 AAT Bioquest的Cell Navigator 荧光脂质滴测定试剂盒是一种简单的测定方法，可以定量测量脂质滴的积累。试剂盒中使用Nile Green 进行亲脂性染色。 Nile Green 在富含脂质的环境中发出强烈的荧光，而在水性介质中的荧光却很少。它是使用荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪检测细胞内脂质滴的重要染色剂。与具有广泛荧光光谱的尼罗河红不同，尼罗河绿 仅用绿色荧光染色细胞内脂质小滴。它可以与其他荧光染料一起用于多色染色。使用FITC滤光片组可以观察到绿色荧光信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Navigator 荧光法脂滴检测分析试剂盒。

点击查看光谱

产品说明书

样品实验方案

简要概述

用测试化合物准备细胞
添加Nile Green 工作溶液
在室温或37°C下孵育10至30分钟
读取荧光强度

溶液配制

1.工作溶液配制

通过将5 µL 200X Nile Green （组分A）稀释到1 mL染色缓冲液（组分B）中来制备Nile Green 工作溶液。 注意：50 µL的Nile Green （组分A）足以容纳一个96孔板。 避光。 Nile Green 的浓度取决于具体应用。 可以根据特定的细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来改变染色条件。

点击查看细胞制备方案

样品示例及操作

1.对于贴壁细胞：

1.1在96孔黑色壁/透明底板（100 µL /孔/ 96孔）中或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上生长细胞。

1.2轻轻吸出培养基，并加入等体积（例如100 µL /孔/ 96孔板）的Nile Green 染色溶液。

1.3将细胞在37°C，5％CO₂培养箱中孵育10-30分钟。

1.4去掉Nile Green 工作溶液（可选）。

1.5用酶标仪读取485/520 nm处的荧光，或使用带有FITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞。
 
2.对于悬浮细胞：

2.1将细胞以1000 rpm的速度离心5分钟，以得到每管1-5×105个细胞。

2.2在500 µL Nile Green 工作溶液中重悬细胞。

2.3在避光条件下，于室温或37°C孵育10至30分钟。

2.4离心除去Nile Green 工作溶液，然后将细胞重悬于500 µL预热的培养基或您选择的缓冲液中，以使每管1-5×10⁵个细胞（可选）。

2.5使用带有FITC滤光片组或流式细胞仪在FL1通道的荧光显微镜监控荧光的增加。

图1.使用Cell Navigator 脂质液滴荧光测定试剂盒的对照（左）和油酸处理的HeLa细胞（右）中细胞内脂质液滴的荧光图像。 将HeLa细胞与300 uM油酸孵育24小时，以诱导细胞内脂质液滴的形成。 用PBS洗涤后，将细胞用1X Nile Green 和Hoechst 33342（Cat＃17533）标记。

Cell Navigator F-肌动蛋白（F-Actin）标记试剂盒 橙色荧光

简要概述

        Cell Navigator F-肌动蛋白（F-Actin）标记试剂盒是一套荧光工具，用于标记亚细胞细胞器，如膜，溶酶体，线粒体和细胞核等。活细胞区的选择性标记提供了一种研究空间细胞事件的有效方法。
        该特定试剂盒用于标记橙色荧光中固定细胞的F-肌动蛋白。该试剂盒使用橙色荧光鬼笔环肽缀合物，其选择性结合F-肌动蛋白。橙色荧光鬼笔环肽缀合物具有Ex / Em = 550 / 575nm。 缀合物对荧光成像也具有良好的光稳定性。 它是一种高亲和力探针，用于标记，鉴定和定量甲醛固定和透化组织切片，细胞培养或无细胞实验中的F-肌动蛋白。Cell Navigator F-肌动蛋白（F-Actin）标记试剂盒是美国AAT Bioquest 研发的产品。

产品说明书

样品分析 

概述

准备样品（微孔板孔）从板上取下液体

加入100μL/孔的iFluor 546-鬼笔环肽溶液

在室温下染色细胞15到60分钟洗涤细胞

使用TRITC通道在显微镜下观察样品（Ex / Em = 550/575 nm）

注意：打开前将所有组件加热至室温

操作步骤

1.准备1X iFluor 546-鬼笔环肽工作溶液：

将10μL的iFluor 546-鬼笔环肽（组分A）加入10mL标记缓冲液（组分B）中。

注意1：未使用的1X iFluor 546-鬼笔环肽原液应等分并保存在-20 ℃，避光。

注意2：不同的细胞类型可能染色不同。 应相应地制备iFluor 546-鬼笔环肽工作溶液的浓度。

2.染色细胞：

2.1执行甲醛固定。 在室温下用3.0-4.0％甲醛的PBS孵育细胞10-30分钟。

2.2用PBS冲洗固定的细胞2-3次。

2.3可选：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定细胞（步骤2.2）3至5分钟，以增加渗透性。 用PBS冲洗细胞2-3次。

2.4将100μL/孔（96孔板）的iFluor 546-鬼笔环肽工作溶液（来自步骤1）加入固定的细胞（来自步骤2.2或2.3），并在室温下将细胞染色15至60分钟。

2.5用PBS轻轻冲洗细胞2至3次以去除多余的染料，然后使用TRITC通道进行板密封和成像。

        图1.用甲醛固定并用Cell Navigator F-肌动蛋白标记试剂盒染色的CPA细胞的图像*在Costar黑色96孔板中的橙色荧光* A：用1X iFluor 546-鬼笔环肽标记细胞仅30分钟。 B：用鬼笔环肽处理细胞10分钟，然后用1X iFluor 546-鬼笔环肽染色30分钟。

Cell Navigator F-肌动蛋白（F-Actin）标记试剂盒 红色荧光

简要概述

        Cell Navigator F-肌动蛋白（F-Actin）标记试剂盒是一套荧光工具，用于标记亚细胞细胞器，如膜，溶酶体，线粒体和细胞核等。活细胞区的选择性标记提供了一种研究空间细胞事件的有效方法。
        该特定试剂盒用于标记橙色荧光中固定细胞的F-肌动蛋白。该试剂盒使用橙色荧光鬼笔环肽缀合物，其选择性结合F-肌动蛋白。橙色荧光鬼笔环肽缀合物具有Ex / Em = 583 / 603nm。 缀合物对荧光成像也具有良好的光稳定性。 它是一种高亲和力探针，用于标记，鉴定和定量甲醛固定和透化组织切片，细胞培养或无细胞实验中的F-肌动蛋白。Cell Navigator F-肌动蛋白（F-Actin）标记试剂盒是美国AAT Bioquest 研发的产品。

点击查看光谱

产品说明书

样品分析 

概述

准备样品（微孔板孔）从板上取下液体

加入100μL/孔的iFluor 594-鬼笔环肽溶液

在室温下染色细胞15到60分钟洗涤细胞

在显微镜下观察样品（Ex / Em = 583/603 nm）

注意：打开前将所有组件加热至室温

操作步骤

1.准备1X iFluor 594-鬼笔环肽工作溶液：

将10μL的iFluor 594-鬼笔环肽（组分A）加入10mL标记缓冲液（组分B）中。

注意1：未使用的1X iFluor 594-鬼笔环肽原液应等分并保存在-20 ℃，避光。

注意2：不同的细胞类型可能染色不同。 应相应地制备iFluor 594-鬼笔环肽工作溶液的浓度。

2.染色细胞：

2.1执行甲醛固定。 在室温下用3.0-4.0％甲醛的PBS孵育细胞10-30分钟。

。

2.2用PBS冲洗固定的细胞2-3次。

2.3可选：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定细胞（步骤2.2）3至5分钟，以增加渗透性。 用PBS冲洗细胞2-3次。

2.4将100μL/孔（96孔板）的iFluor 594-鬼笔环肽工作溶液（来自步骤1）加入固定的细胞（来自步骤2.2或2.3），并在室温下将细胞染色15至60分钟。

2.5用PBS轻轻冲洗细胞2至3次以去除多余的染料，然后进行板密封和成像。

Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 橙色荧光

简要概述

        Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 橙色荧光 是一套荧光成像工具，用于标记亚细胞细胞器，如膜，溶酶体，线粒体，细胞核等。活细胞区的选择性标记为研究空间细胞事件提供了一种强大的方法和时间背景。

        该特定试剂盒设计用于在Ex / Em =542/556nm处以大斯托克斯位移的橙色荧光标记活细胞的溶酶体。该试剂盒使用专有的溶解性染料，可能通过溶酶体pH梯度选择性地积聚在溶酶体中。溶致指示剂，一种疏水性化合物，很容易渗透完整的活细胞，并被困在溶酶体内。进入溶酶体后，其荧光显着增强。这一关键特征显着降低了其染色背景，使其可用于多种研究，包括细胞粘附，趋化性，多药耐药性，细胞活力，细胞凋亡和细胞毒性。该套件提供所有必要组件。 它适用于悬浮细胞和贴壁细胞。Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 橙色荧光 是美国AAT Bioquest研发的产品。

点击查看光谱

产品说明书

分析方案

概述

准备细胞

添加染料工作溶液

在37°C孵育30分钟至2小时

在荧光显微镜下Ex / Em = 542 / 556nm处进行分析

操作方法

1.准备溶酶体染色溶液：

1.1解冻 Lysolite Orange（组分A）至室温。

1.2通过将20μLLysolite Orange（组分A）稀释到10mL活细胞染色缓冲液（组分B）中制备染料工作溶液。

注1：对于一个96孔板，20μLLysolite Orange（组分A）就足够了。 将未使用的Lysolite Orange（组分A）等分并储存在<-20℃。 避光，避免反复冻融循环。

注2：荧光溶酶体指示剂的浓度根据具体应用而变化。 可以根据特定细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来修改染色条件。

2.准备和染色细胞：

2.1对于粘附细胞：在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上培养细胞。当细胞达到所需的汇合时，加入等体积（如100μL/孔/ 96孔板）的染料加工溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37℃，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。使用配有TRITC过滤器组的荧光显微镜观察细胞。

注意：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。

2.2对于悬浮细胞：以1,000rpm离心细胞5分钟以获得细胞沉淀并吸出上清液。在预热的生长培养基中轻轻重悬细胞沉淀，然后加入等体积的染料加工溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37℃，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。使用配有TRITC过滤器组的荧光显微镜观察细胞。

注1：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或培养时间以使染料积累。

注2：悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）处理过的盖玻片上，并作为贴壁细胞染色（见步骤2.1）。

	A: LysoBrite™ Orange (from AAT Bioquest)	B: LysoTracker™ Red (from Invitrogen)
0 second
120 seconds

图1.在Costar黑色96孔板中用A：Cell Navigator TM溶酶体染色试剂盒或B：LysoTracker®RedDND-99（来自Invitrogen）染色的Hela细胞的图像。 通过使用Olympus荧光显微镜在0和120秒曝光时间比较TRTIC信号。

Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 绿色荧光

简要概述

        Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 绿色荧光是一套荧光成像工具，用于标记亚细胞细胞器，如膜，溶酶体，线粒体，细胞核等。活细胞区的选择性标记为研究空间细胞事件提供了一种强大的方法和时间背景。

        该特定试剂盒设计用于在Ex / Em =445/503nm处以大斯托克斯位移的绿色荧光标记活细胞的溶酶体。该试剂盒使用专有的溶解性染料，可能通过溶酶体pH梯度选择性地积聚在溶酶体中。溶致指示剂，一种疏水性化合物，很容易渗透完整的活细胞，并被困在溶酶体内。进入溶酶体后，其荧光显着增强。这一关键特征显着降低了其染色背景，使其可用于多种研究，包括细胞粘附，趋化性，多药耐药性，细胞活力，细胞凋亡和细胞毒性。该套件提供所有必要组件。 它适用于悬浮细胞和贴壁细胞。Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 绿色荧光 是美国AAT Bioquest研发的产品。

点击查看光谱

产品说明书

分析方案

概述

准备细胞

添加染料工作溶液

在37°C孵育30分钟至2小时

在荧光显微镜下Ex / Em = 445 / 503nm处进行分析

操作方法

1.准备溶酶体染色溶液：

1.1解冻 Lysolite Green（组分A）至室温。

1.2通过将20μLLysolite Green（组分A）稀释到10mL活细胞染色缓冲液（组分B）中制备染料工作溶液。

注1：对于一个96孔板，20μLLysolite Green（组分A）就足够了。 将未使用的Lysolite Green（组分A）等分并储存在<-20℃。 避光，避免反复冻融循环。

注2：荧光溶酶体指示剂的浓度根据具体应用而变化。 可以根据特定细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来修改染色条件。

2.准备和染色细胞：

2.1对于粘附细胞：在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上培养细胞。当细胞达到所需的汇合时，加入等体积（如100μL/孔/ 96孔板）的染料加工溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37℃，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。使用配有FITC过滤器组的荧光显微镜观察细胞。

注意：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。

2.2对于悬浮细胞：以1,000rpm离心细胞5分钟以获得细胞沉淀并吸出上清液。在预热的生长培养基中轻轻重悬细胞沉淀，然后加入等体积的染料加工溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37℃，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。使用配有FITC过滤器组的荧光显微镜观察细胞。

注1：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或培养时间以使染料积累。

注2：悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）处理过的盖玻片上，并作为贴壁细胞染色（见步骤2.1）。

图1.使用Cell Navigator 溶酶体染色试剂盒染色的U2OS细胞图像* Costar黑色96孔板中的绿色荧光*

Cell Navigator 细胞膜染色试剂盒 红色荧光

简要概述

        Cell Navigator 细胞膜染色试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于染色细胞膜的试剂盒，Cell Navigator 细胞膜染色试剂盒可快速，均匀地标记质膜，而没有凝集素表现出的细胞类型差异。它可以用作HCS（高含量筛选）的分割工具，以及对细胞质膜进行染色以用于标准荧光显微镜检查。试剂盒中使用的染色剂可以固定，但不能通透，因此不适用于还涉及通过抗体探测内部靶标的实验。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Navigator 细胞膜染色试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.在生长培养基中准备细胞
2.将细胞与Cellpaint 深红色工作溶液在37°C下孵育10-20分钟
3.在荧光显微镜下以Ex / Em = 640/660 nm（Cy5滤光片组）分析细胞

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Cellpaint 深红色原液（500X）：
将100 µL DMSO（组分C）添加到Cellpaint 深红色（组分A）的小瓶中，制成500X Cellpaint Deep Red储备液。 注意：避光。为了存放，请将管子紧紧密封。

2.工作溶液配制

将20 µL 500X Cellpaint 深红色原液添加到10 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成Cellpaint Deep Red工作溶液。 这种Cellpaint 深红色工作溶液在室温下至少可稳定8小时。 避光。 注意：20 µL 500X Cellpaint 深红色500X储备液足以用于一个96孔板。

点击查看细胞制备方案

样品示例及操作

1.在细胞板中加入100 µL /孔（96孔板）或50 µL /孔（384孔板）的Cellpaint 深红色工作溶液。

2.避光保存，在37°C下孵育细胞10-20分钟。 注意：细胞膜探针的浓度取决于具体应用。 可以根据特定的细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来改变染色条件。

3.除去每个孔中的Cellpaint 深红色工作溶液。

4.用生理缓冲液（例如HHBS，PBS或您选择的缓冲液）洗涤细胞3次。

5.染色后固定细胞（可选）。用4％甲醛固定细胞15-30分钟。 用生理缓冲液洗涤细胞三遍。

6.使用装有Cy5滤光片组（Ex / Em = 640/660 nm）的荧光显微镜观察细胞中的荧光信号。

图1.在96孔黑色壁/透明底板中，用Cellpaint 深红色染色的HeLa细胞的荧光图像。 使用带有Cy5滤光片的荧光显微镜对细胞成像。

Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 蓝色荧光

简要概述

        Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 蓝色荧光 是一套荧光成像工具，用于标记亚细胞细胞器，如膜，溶酶体，线粒体，细胞核等。活细胞区的选择性标记为研究空间细胞事件提供了一种强大的方法和时间背景。

        该特定试剂盒设计用于在Ex / Em =350/440nm处以大斯托克斯位移的蓝色荧光标记活细胞的溶酶体。该试剂盒使用专有的溶解性染料，可能通过溶酶体pH梯度选择性地积聚在溶酶体中。溶致指示剂，一种疏水性化合物，很容易渗透完整的活细胞，并被困在溶酶体内。进入溶酶体后，其荧光显着增强。这一关键特征显着降低了其染色背景，使其可用于多种研究，包括细胞粘附，趋化性，多药耐药性，细胞活力，细胞凋亡和细胞毒性。该套件提供所有必要组件。 它适用于悬浮细胞和贴壁细胞。Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 蓝色荧光 是美国AAT Bioquest研发的产品。

产品说明书

分析方案

概述

准备细胞

添加染料工作溶液

在37°C孵育30分钟至2小时

在荧光显微镜下Ex / Em = 360 / 445nm（DAPI滤光片组）处进行分析

操作方法

1.准备溶酶体染色溶液：

1.1解冻LysoBrite Blue（组分A）至室温。

1.2通过将20μLLysoBrite Blue（组分A）稀释到10mL活细胞染色缓冲液（组分B）中制备染料工作溶液。

注1：对于一个96孔板，20μLLysoBrite NIR（组分A）就足够了。 将未使用的LysoBrite Blue（组分A）等分并储存在<-20℃。 避光，避免反复冻融循环。

注2：荧光溶酶体指示剂的浓度根据具体应用而变化。 可以根据特定细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来修改染色条件。

2.准备和染色细胞：

2.1对于粘附细胞：在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上培养细胞。当细胞达到所需的汇合时，加入等体积（如100μL/孔/ 96孔板）的染料加工溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37℃，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。使用配有Dapi过滤器组的荧光显微镜观察细胞。

注意：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。

2.2对于悬浮细胞：以1,000rpm离心细胞5分钟以获得细胞沉淀并吸出上清液。在预热的生长培养基中轻轻重悬细胞沉淀，然后加入等体积的染料加工溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37℃，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。使用配有Dapi过滤器组的荧光显微镜观察细胞。

注1：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或培养时间以使染料积累。

注2：悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）处理过的盖玻片上，并作为贴壁细胞染色（见步骤2.1）。

图1.使用Cell Navigator 溶酶体染色试剂盒染色的U2OS细胞图像* Costar黑色96孔板中的蓝色荧光*

Cell Navigator 线粒体标记试剂盒 深红色荧光

简要概述

        Cell Navigator 线粒体标记试剂盒是一套荧光成像工具，用于标记细胞器细胞器，如膜，溶酶体，线粒体和细胞核等。活细胞线粒体的选择性标记为研究细胞事件提供了一种强有力的方法。这个特定的试剂盒旨在标记蓝色荧光的活细胞线粒体。该试剂盒使用专有染料，可根据线粒体膜电位梯度选择性累积在线粒体中。线粒体指示剂是一种疏水性化合物，可以很容易地渗透完整的活细胞，并在进入细胞后被困在线粒体中。该荧光线粒体指示剂长时间保留在线粒体中，因为该指示剂携带细胞保留组。这一关键特征显着提高了染色效率。标签协议是健壮的，需要少动手时间。它可以很容易地适用于各种荧光平台，如微孔板分析，免疫细胞化学和流式细胞术。它适用于多种研究，包括细胞粘附，趋化性，多药耐药性，细胞活力，细胞凋亡和细胞毒性。该试剂盒为所有重要组分提供了优化的细胞标记方案。它适用于增殖和非增殖细胞，可用于悬浮细胞和贴壁细胞。Cell Navigator 线粒体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。

点击查看光谱

产品说明书

样品分析

1.准备线粒体染色溶液：

1.1将所有组件温度调至室温

1.2通过将20μLMitolite Deep Red（组分A）稀释到10mL活细胞染色缓冲液（组分B）中制备染料工作溶液

注1：对于一个96孔板，20μL的500X Mitolite Deep Red（组分A）就足够了。在≤-20ºC下等分并储存未使用的500X Mitolite Deep Red。避光，避免反复冻融循环

注2：荧光线粒体指示剂的浓度根据具体应用而变化。可以根据特定细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来修改染色条件

2.准备和染色细胞：

2.1对于粘附细胞：在96孔黑色墙壁/透明底板上或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上培养细胞。当细胞达到所需的汇合时，加入等体积（例如对于96孔板为100μL，对于384孔板为25μL）的染料加工溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37ºC，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。用Hanks和20mM Hepes缓冲液（HH缓冲液）或您选择的缓冲液（例如浓度为1：1的生长培养基缓冲液）替换染料上样溶液。

注意：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。

2.2对于悬浮细胞：以1000rpm离心细胞5分钟以获得细胞沉淀并吸出上清液。在预热（37℃）生长培养基中轻轻重悬细胞沉淀，并加入等体积的染料加工溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37ºC，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。用Hanks和20mM Hepes缓冲液（HH缓冲液）或您选择的缓冲液（例如浓度为1：1的生长培养基缓冲液）替换染料上样溶液。

注1：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或培养时间以使染料积累。

注2：悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）处理过的盖玻片上，并作为粘附细胞染色（见步骤2.1）。

Cell Navigator 活细胞内质网染色试剂盒*蓝色荧光*

简要概述

Cell Navigator 活细胞内质网染色试剂盒是美国AAT Bioquest生产的内质网染色试剂盒，内质网（ER）是真核生物细胞中的一种细胞器，其形成扁平的，膜封闭的囊或称为池状的管状结构的互连网络。 ER的膜与外核膜连续。 ER在大多数类型的真核细胞中发生，但在红细胞和精子中不存在。 此Cell Navigator 活细胞内质网（ER）染色试剂盒使用我们的ER Tracer Blue作为ER标记。 ER Tracer 蓝色染料是一种可透过细胞的荧光染料，对ER具有高度选择性。 该染色剂由蓝色荧光染料和ER粘合剂组成，它们在大多数细胞类型中选择性结合ER。 对于某些细胞，ER Tracer Blue可能无法选择性结合ER。 ER Tracer Blue具有类似于DAPI的光谱特性，这使得该套件可与DAPI滤光片组一起使用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Navigator 活细胞内质网染色试剂盒。 

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产品说明书

样本分析方案

简要概述

1. 在生长培养基中准备细胞

2. 将细胞与ER Blue 工作溶液在37℃下孵育15-30分钟

3. 使用DAPI滤光片组在荧光显微镜下分析

溶液配制

1.储备溶液配制

        除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
ER Blue 储备溶液（500X）：将20 uL DMSO（组分C）添加到ER Blue （组分A）中，制成500X储备溶液。

2.工作溶液配制

ER Blue 工作溶液：将2 uL 500X储备溶液添加到1 mL活细胞染色缓冲液（组分B）中，并充分混合。 工作溶液在室温下稳定至少2小时。 注意：20 uL的500 X ER Blue 储备溶液足以容纳一个96孔板。 如果未密封的ER Blue 500X储备溶液可以分装，并在≤-20℃的温度下保存两周。 避光并避免反复冻融循环。 有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

操作步骤

1. 处理样品。注意：可以将工作溶液直接添加到细胞培养基中。或者，移出细胞培养基并用缓冲液洗涤。

2. 在微孔板中添加100 uL /孔（96孔板）或50 uL /孔（384孔板）的ER Blue 工作溶液。将细胞与工作液在37℃下孵育15-30分钟，避光保存。注意：ER探针的浓度取决于具体应用。浓度高于工作溶液可能对细胞有毒性。可以根据探针对特定的细胞类型和细胞/组织的渗透性来改变染色条件。

3. 除去每个孔中的工作溶液。用缓冲液洗涤细胞三遍。

4. 染色后固定细胞（可选）。用4％甲醛固定细胞5 -10分钟。缓冲液洗涤细胞三遍。

5. 使用带有DAPI滤光片组的荧光显微镜观察细胞中的荧光信号。

图示

Cell Navigator 活细胞微管蛋白染色试剂盒

简要概述

Cell Navigator 活细胞微管蛋白染色试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于标记活细胞的试剂盒，Cell Navigator 活细胞微管蛋白染色试剂盒提供了一种可靠的方法，可以用Tubulite Red对活细胞中的微管蛋白进行荧光成像。 该探针可透过活细胞，因此不需要固定细胞即可对微管蛋白进行成像。 它可以方便地用于跟踪活细胞中微管蛋白的聚合过程。 它的红色光谱波长和良好的细胞渗透性使该探针易于与其他颜色（如GFP表达的细胞）或核染料（如DAPI）一起使用。 中性的Tubulite Red容易穿过活细胞的质膜。 亲脂性封闭基团一旦进入细胞，就会被酯酶裂解，形成带负电荷的产物，并充分保留在细胞内部。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Navigator 活细胞微管蛋白染色试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用5×10⁵至1×10⁶细胞/ mL的密度制备含测试化合物的细胞
2.准备Tubulite Red工作溶液并将其添加到细胞中
3.在37℃下孵育30至60分钟
4.使用Cy5滤光片组读取荧光强度

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
Tubulite Red储备液（500X）：
将25 µL（Cat＃23170）或75 µL（Cat＃23171）DMSO（组分D）添加到Tubulite Red（组分A）小瓶中，并充分混合。 注意：分装并在-20℃下存储未使用的Tubulite Red储备液。 避免重复冷冻/融化循环。

2.工作溶液配制

Tubulite Red工作溶液（1X）：
将2.5 µL Tubulite Red储备液储备溶液和100 µL 25 mM ReadiUse 丙磺舒（组分D）加入1 mL的测定缓冲液（组分B）或您选择的缓冲液中，并充分混合。 注意：我们建议为每次使用都使Tubulite Red工作溶液新鲜。 工作溶液可以稳定几个小时。

点击查看细胞制备方案

样品示例及操作

1.根据需要准备细胞样品。

2.除去细胞生长培养基，并用PBS（未提供）或您选择的任何其他缓冲液洗涤细胞。（可选的）。

3.加入100 µL TubuliteTM Red工作溶液，并在37oC培养箱中孵育30至60分钟。 注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。

4.除去工作溶液，并用PBS或您选择的其他任何缓冲液（2.5毫安的丙磺舒（从组分C稀释））洗涤细胞两次。

5.用含2.5 mM丙磺舒的测定缓冲液（从组分C稀释）覆盖细胞，并使用Cy5滤光片组在荧光显微镜下监控荧光强度。

图1.活HeLa细胞中微管蛋白的成像。 将HeLa细胞与Tubulite Red和DAPI（Cat＃17507）在37℃，5％CO2培养箱中共同标记60分钟。 用荧光显微镜（Cy5滤光片组）拍摄荧光图像。

Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 绿色荧光 405nm激发

简要概述

        Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 绿色荧光 405nm激发是一套荧光成像工具，用于标记亚细胞细胞器，如膜，溶酶体，线粒体，细胞核等。活细胞区的选择性标记为研究空间细胞事件提供了一种强大的方法和时间背景。

        该特定试剂盒设计用于在Ex / Em = 405 / 520nm处以大斯托克斯位移的绿色荧光标记活细胞的溶酶体。该试剂盒使用专有的溶解性染料，可能通过溶酶体pH梯度选择性地积聚在溶酶体中。溶致指示剂，一种疏水性化合物，很容易渗透完整的活细胞，并被困在溶酶体内。进入溶酶体后，其荧光显着增强。这一关键特征显着降低了其染色背景，使其可用于多种研究，包括细胞粘附，趋化性，多药耐药性，细胞活力，细胞凋亡和细胞毒性。该套件提供所有必要组件。 它适用于悬浮细胞和贴壁细胞。Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 绿色荧光 405nm激发是美国AAT Bioquest研发的产品。

产品说明书

分析方案

概述

准备细胞

添加染料工作溶液

在37°C孵育30分钟至2小时

在荧光显微镜下Ex / Em = 405 / 480nm（紫外滤光片组）处进行分析

操作方法

1.准备溶酶体染色溶液：

1.1解冻 Lysolite VLG26（组分A）至室温。

1.2通过将20μLLysolite VLG26（组分A）稀释到10mL活细胞染色缓冲液（组分B）中制备染料工作溶液。

注1：对于一个96孔板，20μLLysolite VLG26（组分A）就足够了。 将未使用的Lysolite VLG26（组分A）等分并储存在<-20℃。 避光，避免反复冻融循环。

注2：荧光溶酶体指示剂的浓度根据具体应用而变化。 可以根据特定细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来修改染色条件。

2.准备和染色细胞：

2.1对于粘附细胞：在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上培养细胞。当细胞达到所需的汇合时，加入等体积（如100μL/孔/ 96孔板）的染料加工溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37℃，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。使用配有Violet滤光片组（Ex / Em = 405 / 480nm）的荧光显微镜观察细胞。

注意：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。

2.2对于悬浮细胞：以1,000rpm离心细胞5分钟以获得细胞沉淀并吸出上清液。在预热的生长培养基中轻轻重悬细胞沉淀，然后加入等体积的染料加工溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37℃，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。使用配有Violet滤光片组（Ex / Em = 405 / 480nm）的荧光显微镜观察细胞。

注1：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或培养时间以使染料积累。

注2：悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）处理过的盖玻片上，并作为贴壁细胞染色（见步骤2.1）。

图1.使用Cell Navigator 溶酶体染色试剂盒染色的U2OS细胞图像使用Costar黑色96孔板进行405 nm激发的绿色荧光

Cell Navigator 活细胞内质网染色试剂盒 红色荧光

简要概述

        Cell Navigator 活细胞内质网染色试剂盒是美国AAT Bioquest生产的内质网染色试剂盒，内质网（ER）是真核生物细胞中的一种细胞器，其形成扁平的，膜封闭的囊或称为池状的管状结构的互连网络。 ER的膜与外核膜连续。 ER在大多数类型的真核细胞中发生，但在红细胞和精子中不存在。 Cell Navigator 活细胞内质网（ER）染色试剂盒使用我们的ER Tracer Green作为ER标记物。 ER Tracer 红色染色是一种细胞渗透性荧光染料，对ER具有高度选择性。 该染色剂由红色荧光染料和ER粘合剂组成，其在大多数细胞类型中选择性地结合ER。 对于某些细胞，ER Tracer Green可能无法选择性地与ER结合。 ER Tracer Green具有与FITC基本相同的光谱特性，使该试剂盒便于使用FITC滤光片组。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Navigator 活细胞内质网染色试剂盒。 

产品说明书

样本分析方案

简要概述

1.在生长培养基中制备细胞
2.用ER Green red工作溶液在37ºC孵育细胞15-30分钟
3.在Ex / Em = 490 / 520nm（FITC滤光片组）下在荧光显微镜下分析细胞

溶液配制

1.储备溶液配制

        除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
ER Green 原液（500X）：
将20μLDMSO（组分C）加入到ER red （组分A）的小瓶中并充分混合以制备500X ER red 储备溶液。 注意：20μL的500X ER red 原液足以容纳一个96孔板。 如果管子密封，未使用的500X ER red 储备溶液可以在≤-20ºC下储存两周。 避光。

2.工作溶液配制

将20μL500XER red 储备溶液加入10 mL活细胞染色缓冲液（组分B）中，充分混合，制成ER red 工作溶液。 该ER red 工作溶液在室温下稳定至少2小时。 避光。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

操作步骤

1.在细胞板中加入100μL/孔（96孔板）或50μL/孔（384孔板）的ER red 工作溶液。 用37℃的工作溶液孵育细胞15-30分钟，避光。 注意：ER探针的浓度根据具体应用而有所不同。 浓度高于工作溶液可能对细胞有毒。 可以根据特定细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来修改染色条件。

2.在每个孔中移除ER red 工作溶液。 用物理相关缓冲液洗涤细胞三次。

3.染色后修复细胞（可选）。 用4％甲醛固定细胞5-10分钟。 用物理相关缓冲液洗涤细胞三次。

4.使用具有FITC滤光片组（Ex / Em = 490 / 520nm）的荧光显微镜观察细胞中的荧光信号。

数据分析

Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 红色荧光

简要概述

        Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 红色荧光 是一套荧光成像工具，用于标记亚细胞细胞器，如膜，溶酶体，线粒体，细胞核等。活细胞区的选择性标记为研究空间细胞事件提供了一种强大的方法和时间背景。

        该特定试剂盒设计用于在Ex / Em =575/597nm处以大斯托克斯位移的红色荧光标记活细胞的溶酶体。该试剂盒使用专有的溶解性染料，可能通过溶酶体pH梯度选择性地积聚在溶酶体中。该指示剂中的溶质，是一种疏水性化合物，很容易渗透到完整的活细胞，并被保留在溶酶体内一段时间。进入溶酶体后，其荧光显著增强。这一关键特征显著降低了其染色背景，使其可用于多种研究，包括细胞粘附，趋化性，多药耐药性，细胞活力，细胞凋亡和细胞毒性。该试剂盒提供所有必要组件。 它适用于悬浮细胞和贴壁细胞。Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 红色荧光 是美国AAT Bioquest研发的产品。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒。 

点击查看光谱

适用仪器

产品说明书

试验方案

1. 准备细胞

2. 添加染料工作溶液

3. 在37°C孵育30分钟至2小时

4. 在荧光显微镜下Ex / Em = 575 / 597nm处进行分析

注意：1）实验前，取出转染试剂进行室温冻结。

样品示例及使用方法

1.准备溶酶体染色溶液：

1.1  取出试剂盒中A、B组分，室温避光静置5-10min。

1.2  移取20μLLysoBrite Red（组分A），用10mL活细胞染色缓冲液（组分B）进行稀释，制备染料工作液。

注意：1) 20μL的500XLysoBrite Red （组分A）足够完成一个96孔板，根据要求分装并储存未使用的500XLysoBrite Red（组分A）,避免反复冻融。

        2)荧光溶酶体指示剂的浓度根据实际应用而改变，可以根据探针的渗透性对细胞类型、细胞或组织的染色条件进行调整。

2.细胞染色：

2.1对于贴壁细胞：

在96黑色/透明微孔板（100μL/孔/ 96孔板）或装有适当培养基内的培养皿的盖玻片上培养细胞，当细胞达到所需的汇合时，在96孔板或培养皿内加入等量的LysoBrite Red工作液，在37℃、5％CO₂条件下培养箱中孵育30分钟，用预温(37°C) Hanks和20 mM Hepes缓冲液(HBSS)或自配的缓冲液清洗细胞两次，用HBSS或生长培养基填充细胞孔，再使用配有TRITC过滤器组的荧光显微镜观察细胞，使之带红色荧光(Ex/Em = 575/600 nm)。

注意：1）如果细胞看起来没有充分染色，建议适当增加染料浓度或孵育时间。

2.2对于悬浮细胞：

向细胞中加入等量的LysoBrite Red工作液。在37℃、5％CO₂条件下培养箱中孵育30分钟，用预温(37°C) Hanks和20 mM Hepes缓冲液(HBSS)或自配的缓冲液清洗细胞两次，用HBSS或生长培养基填充细胞孔，再使用配有TRITC过滤器组的荧光显微镜观察细胞，使之带红色荧光(Ex/Em = 575/600 nm)。

注意:  1）如果细胞看起来没有充分染色，建议适当增加染料浓度或孵育时间。

         2）悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）处理过的盖玻片上，并作为贴壁细胞染色。

示例数据分析及图示

图一：在Costar黑色透明底96孔板中用Cell Navigator 溶酶体染色试剂盒染色Hela细胞的荧光成像结果。

图二：HeLa细胞分别用A和B，置于Costar黑壁/透明底96孔板中染色后的荧光成像结果，在0秒和120秒的曝光时间下，使用Olympus荧光显微镜对信号进行比较。A: Cell Navigator溶酶

Cell Navigator 线粒体标记试剂盒 近红外荧光

简要概述

        Cell Navigator 线粒体标记试剂盒是一套荧光成像工具，用于标记细胞器细胞器，如膜，溶酶体，线粒体和细胞核等。活细胞隔室的选择性标记为研究细胞事件提供了一种强有力的方法。这个特定的试剂盒旨在标记蓝色荧光的活细胞线粒体。该试剂盒使用专有染料，可选择性累积在线粒体中，可能是线粒体膜电位梯度。线粒体指示剂是一种疏水性化合物，可以很容易地渗透完整的活细胞，并在进入细胞后被困在线粒体中。该荧光线粒体指示剂长时间保留在线粒体中，因为该指示剂携带细胞保留组。这一关键特征显着提高了染色效率。标签协议是健壮的，需要 少的动手时间。它可以很容易地适用于各种荧光平台，如微孔板分析，免疫细胞化学和流式细胞术。它适用于多种研究，包括细胞粘附，趋化性，多药耐药性，细胞活力，细胞凋亡和细胞毒性。该试剂盒为所有重要组分提供了优化的细胞标记方案。它适用于增殖和非增殖细胞，可用于悬浮细胞和贴壁细胞。Cell Navigator 线粒体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。

点击查看光谱

产品说明书

样品分析

1.准备线粒体染色溶液：

1.1将所有组件温度调至室温

1.2通过将20μLMitolite NIR（组分A）稀释到10mL活细胞染色缓冲液（组分B）中制备染料工作溶液

注1：对于一个96孔板，20μL的500X Mitolite NIR（组分A）就足够了。在≤-20ºC下等分并储存未使用的500X Mitolite NIR。避光，避免反复冻融循环

注2：荧光线粒体指示剂的佳浓度根据具体应用而变化。可以根据特定细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来修改染色条件

2.准备和染色细胞：

2.1对于粘附细胞：在96孔黑色墙壁/透明底板上或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上培养细胞。当细胞达到所需的汇合时，加入等体积（例如对于96孔板为100μL，对于384孔板为25μL）的染料加工溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37ºC，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。用Hanks和20mM Hepes缓冲液（HH缓冲液）或您选择的缓冲液（例如浓度为1：1的生长培养基缓冲液）替换染料上样溶液。

注意：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。

2.2对于悬浮细胞：以1000rpm离心细胞5分钟以获得细胞沉淀并吸出上清液。在预热（37℃）生长培养基中轻轻重悬细胞沉淀，并加入等体积的染料加工溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37ºC，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。用Hanks和20mM Hepes缓冲液（HH缓冲液）或您选择的缓冲液（例如浓度为1：1的生长培养基缓冲液）替换染料上样溶液。

注1：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或培养时间以使染料积累。

注2：悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）处理过的盖玻片上，并作为粘附细胞染色（见步骤2.1）。

Cell Navigator 荧光法脂滴检测分析试剂盒 红色荧光

简要概述

        Cell Navigator 荧光法脂滴检测分析试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于脂滴检测的试剂盒，脂质液滴，也称为脂质体，油体或脂肪体，是富含脂质的细胞器，可调节中性脂质的储存和水解。它们还充当许多重要生物过程（如脂肪酸和细胞胆固醇）的脂质来源的贮藏库，以促进能量，膜的形成和维持。细胞质脂质滴的异常积累发生在多种病理状况中，并且可以指示代谢缺陷或发病机理。 AAT Bioquest的Cell Navigator 荧光脂质滴测定试剂盒是一种简单的测定方法，可以定量测量脂质滴的积累。试剂盒中使用Nile Green 进行亲脂性染色。 Nile Green 在富含脂质的环境中发出强烈的荧光，而在水性介质中的荧光却很少。它是使用荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪检测细胞内脂质滴的重要染色剂。与具有广泛荧光光谱的尼罗河红不同，尼罗河绿 仅用绿色荧光染色细胞内脂质小滴。它可以与其他荧光染料一起用于多色染色。使用FITC滤光片组可以观察到绿色荧光信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Navigator 荧光法脂滴检测分析试剂盒。

点击查看光谱

产品说明书

样品实验方案

简要概述

用测试化合物准备细胞
添加Nile Green 工作溶液
在室温或37°C下孵育10至30分钟
读取荧光强度

溶液配制

1.工作溶液配制

通过将5 µL 200X Nile Green （组分A）稀释到1 mL染色缓冲液（组分B）中来制备Nile Green 工作溶液。 注意：50 µL的Nile Green （组分A）足以容纳一个96孔板。 避光。 Nile Green 的浓度取决于具体应用。 可以根据特定的细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来改变染色条件。

点击查看细胞制备方案

样品示例及操作

1.对于贴壁细胞：

1.1在96孔黑色壁/透明底板（100 µL /孔/ 96孔）中或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上生长细胞。

1.2轻轻吸出培养基，并加入等体积（例如100 µL /孔/ 96孔板）的Nile Green 染色溶液。

1.3将细胞在37°C，5％CO₂培养箱中孵育10-30分钟。

1.4去掉Nile Green 工作溶液（可选）。

1.5用酶标仪读取485/520 nm处的荧光，或使用带有FITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞。
 
2.对于悬浮细胞：

2.1将细胞以1000 rpm的速度离心5分钟，以得到每管1-5×105个细胞。

2.2在500 µL Nile Green 工作溶液中重悬细胞。

2.3在避光条件下，于室温或37°C孵育10至30分钟。

2.4离心除去Nile Green 工作溶液，然后将细胞重悬于500 µL预热的培养基或您选择的缓冲液中，以使每管1-5×10⁵个细胞（可选）。

2.5使用带有FITC滤光片组或流式细胞仪在FL1通道的荧光显微镜监控荧光的增加。

Cell Navigator 细胞膜染色试剂盒

简要概述

Cell Navigator 细胞膜染色试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于染色细胞膜的试剂盒，Cell Navigator 细胞质膜染色试剂盒可快速，均匀地标记质膜，而没有凝集素表现出的细胞类型差异。 它可以用作HCS（高含量筛选）的分割工具，以及对细胞质膜进行染色以用于标准荧光显微镜检查。 试剂盒中使用的绿色荧光染料可固定但不能通透，因此不适用于还涉及通过抗体探测内部靶标的实验。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Navigator 细胞膜染色试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.在生长培养基中准备细胞
2.准备并向细胞添加Cellpaint Green工作溶液
3.在37℃下孵育5至20分钟
4.使用FITC滤光片组读取荧光强度

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
Cellpaint 绿色原液（500X）：
将100 uL DMSO（组分C）添加到Cellpaint Green（组分A）小瓶中，制成500X储备溶液。 注意：20 µL Cellpaint Green 500X储备溶液足以用于一个96孔板。 如果管密封严密，可以将未使用的Cellpaint Green 500X储备溶液分装并在≤-20ºC下保存1个月。 避光并避免重复的冻融循环。

2.工作溶液配制

Cellpaint 绿色工作溶液（1X）：
将20 uL的500X储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。 注意：我们建议在使用前使工作溶液新鲜。

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样品示例及操作

1.在细胞板中加入100 uL /孔（96孔板）或50 uL /孔（384孔板）的Cellpaint Green工作溶液。 避光保存，在37ºC下孵育细胞5-20分钟。 注意：细胞膜探针的浓度取决于具体应用。 可以根据特定的细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来改变染色条件。

2.除去每个孔中的工作溶液。 用生理缓冲液（例如HHBS，DPBS或您选择的缓冲液）洗涤细胞3次，并替换为HHBS。

3.可选：染色后固定细胞。 用4％甲醛固定细胞15-30分钟。 用生理缓冲液洗涤细胞三遍。

4.使用带有FITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞中的荧光信号。

图1.在玻片上，Cellpaint Green与Hoechst 33342共染色的HL-60细胞的荧光图像。 使用荧光显微镜，使用带有FITC滤镜的60X油镜对细胞成像。 由于来自细胞边界上方和下方的膜的所有荧光信号均被不加选择地捕获，因此图像显得更加刺破和扩散。 与常规的落射荧光成像相比，共聚焦荧光成像比常规的落射荧光显微镜更灵敏，可以为您提供更多的控制。 如果可以使用共聚焦显微镜，则可能会获得清晰的细胞膜成像。