预涂层 96 孔微孔板

标准

标准稀释缓冲液

洗涤缓冲液

检测试剂A

检测试剂B

稀释剂 A

稀释剂 B

TMB基板

停止解决方案

封板机

37°C 培养箱

多通道和单通道移液器和无菌移液器吸头

喷瓶或自动微孔板清洗机

1.5 毫升试管

蒸馏水

吸水滤纸

100 毫升和 1 升量筒

酶标仪（波长：450 nm）

ELISA 摇床

1) 标准品：用推荐体积的标准稀释缓冲液配制标准品，制成标准溶液。然后按照协议中的说明，使用标准稀释缓冲液对标准溶液进行系列稀释。

2) 洗涤缓冲液：按照方案中的说明，用蒸馏水稀释浓缩的洗涤缓冲液。

3) 检测试剂制备：计算所需工作溶液的总体积。分别用稀释剂 A 和稀释剂 B 以 1:100 稀释检测试剂 A 和检测试剂 B。

1) 设置标准、测试样品和对照孔。

2) 将 100 µl 稀释标准品分装到标准孔中。

3) 将 100 µl 标准稀释缓冲液分装到对照（零）孔中。

4) 将 100 µl 稀释样品分装到样品孔中。在 37 °C 下孵育 1 小时。

5) 将 100 µl 检测试剂 A 分装到每个孔中。在 37 °C 下孵育 1 小时。

6) 洗涤 3 次。

7) 将 100 µl 检测试剂 B 分装到每个孔中。在 37°C 下孵育 30 分钟。

8)洗涤5次。

9) 将 90 µl TMB Substrate 分装到每个孔中。在 37°C 下孵育 10-20 分钟。

10) 分装 50 µl 终止液。

11) 在 450 nm 处测量 OD。

使用前将套件组件和样品平衡至室温 (18 – 25 °C)。建议为每个测试绘制标准曲线。

1. 在预涂板上分别设置标准孔、测试样品孔和对照（零）孔，然后记录它们的位置。建议至少测量每个标准和样品一式两份。

2. 将 100 µL 每个标准品、质控品和样品加入适当的孔中。用盖子密封板并在 37°C 下孵育 1 小时。

3. 取下盖子并丢弃液体。

4. 每孔加入 100 µl 检测试剂 A 工作溶液。用盖子密封板并在 37°C 下孵育 1 小时。

5. 取下盖子并丢弃溶液。用 1X 洗涤缓冲液洗涤板 3 次。

6. 每孔加入 100 µL 检测试剂 B 工作溶液，密封并在 37°C 下孵育 30 分钟。

7. 弃去溶液并用洗涤缓冲液洗涤板 5 次，如上一步所述。

8. 将 90 µl TMB Substrate 分装到每个孔中。用盖子密封板并在 37°C 下孵育 10-20 分钟。避免暴露在光线下。孵育时间仅供参考，最佳时间应由最终用户确定。不要超过 30 分钟。

9. 每孔加入 50 µL 终止液。立即在 450 nm 处读取。