Favorgen FABGK000-Maxi说明书
Favorgen FABGK000-Maxi说明书
Favorgen位于中国台湾国家生物技术园区。它通过自动化系统建立了ISO合格工厂,
生产高质量的分子生物学产品和临床化学试剂。目前,Favorgen在美国,中国,韩国和丹麦设立分支机构,并在30多个国家设立了分销网络。自成立以来,Favorgen已经在其先进的生产设施上投入了大量资金,以竞争力的价格为客户提供高质量的产品。Favorgen致力于通过与学术和行业合作伙伴的内部和合作开展研究,以不断提供高质量的创新产品。
Nucleic-acids extraction Genomic DNA Extraction
核酸提取基因组DNA提取
Favorgen FABGK000-Maxi说明书
FavorPrepTM Blood / Cultured Cell Genomic DNA Extraction Maxi Kit
(For Research Use Only)
Cat. No.
/ preps
FABGK000-Maxi
(2 preps)
FABGK003
(10 preps)
FABGK003-1
(24 preps)
Proteinase K powder+ 11 mg x 2 11 mg x 10 11 mg x 24
FABG Buffer 22 ml 110 ml 265 ml
W1 Buffer* (concentrated) 6.5 ml 33 ml 88 ml
Wash Buffer** (concentrated) 3 ml 20 ml 40 ml
Elution Buffer 6 ml 30 ml 60 ml
FABG Maxi Column 2 pcs 10 pcs 24 pcs
Elution Tube (50 ml tube) 2 pcs 10 pcs 24 pcs
User Manual 1 1 1
Preparation of ProteinaseK solution (20mg/ml) and Wash Buffer for first use:
Cat. No: |
FABGK000-Maxi (2 preps) |
FABGK003 (10 preps) |
FABGK003-1 (24 preps) |
+ ddH2O volume for Proteinase K |
0.5 ml |
||
* ethanol volume for Wash Buffer W1 |
2.5 ml |
12 ml |
32 ml |
**ethanol volume for Wash Buffer W2 |
12 ml |
80 ml |
160 ml |
规格:
原理:自旋柱(硅胶膜)
样本大小:新鲜/冷冻血液10毫升;培养细胞1×10 8
柱容量:500微克DNA
平均DNA产量:35g/1ml全血处理时间:1小时
洗脱体积:0.75~1.5ml
需由用户提供的材料
吸管和管尖
离心机:应能产生4,000克热孵化器的力
烘箱(可选)乙醇(96%~100%)涡旋
重要说明:
本系统中提供的缓冲区包含刺激物。在处理这些缓冲器时,戴上手套和实验室外套。
手术前将热孵化器预热至60°C。
在所有的离心步骤中,使用带有摆动桶转子的离心机和4,000~6,000克的力。
将500升无菌的ddH2O加入到延长K管中,制成22毫克/毫升的原液。确定蛋白酶K粉已*溶解。将库存溶液存放在4°C。
为步骤11(释放步骤)过热释放缓冲器或ddH2O。
血液DNA提取协议
在开始以下步骤之前,请阅读重要说明。
将多达10毫升的样本(全血、布菲大衣)转移到50毫升离心管(未提供)。
–如果样品体积小于10mL,则加入PBS使体积达到10mL。
在样品中加入500升蛋白酶K(20 mg/ml),用旋涡法搅拌均匀。在样品混合物中加入10毫升的光纤光栅缓冲液。通过脉冲旋涡充分混合.
-不要直接将蛋白酶K添加到FABG缓冲液中。
将样品混合物在60℃下孵育15分钟,以使样品分离。在孵化过程中,每3-5分钟倒置一次.
(可选):如果需要无RNA的基因组DNA,在样品混合物中加入80毫升100毫克/毫升的核糖核酸酶A(未提供),在室温下孵育10分钟。
在样品中加入10 ml乙醇(96~100%)。通过漩涡充分混合。如果出现沉淀物,就用喷入的方法打破它。
将FABG Maxi柱放置在50毫升离心管上(未提供)。并将15毫升的样品混合物(添加乙醇)(包括任何沉淀物)仔细转移到FABG Maxi柱。关上盖子 4,000~6,000×g离心3 min。
一
英语字母表的第22个字母 1115
丢弃流道,将剩余的样品混合物转移到相同的FABG Maxi柱上.关闭盖和离心机在4,000~6,000 x g,3分钟,并丢弃流过.
8在FABG Maxi柱上加入4ml W1缓冲液(乙醇加乙醇)。关闭盖子,在4,000~6,000×g离心3 min。丢弃流道,将fbg maxi柱放回50毫升。 离心管。
-确保乙醇在次打开时已加入W1缓冲液。
在FABG Maxi柱上加入7毫升的洗涤缓冲液(加入乙醇)。关闭盖子,在4,000~6,000×g离心15 min。丢弃流道,将fbg maxi柱放回50毫升。 离心管。
–在次打开时,确保已将乙醇添加到清洗缓冲液中。
-重要的一步!确保离心后残余液体被*除去。可能需要在70°C的真空烘箱中继续干燥3英里。 lutes[人名] 卢茨
将FABG Maxi柱放入新的50毫升离心管中。(洗脱管,提供)
FABG Maxi柱膜中心加入0.75~1.5ml预热洗脱缓冲液或ddH2O(pH7.5-9.0)。将FABG马溪柱在室温下放置5 min。
-重要的一步!若要进行有效洗脱,需在FABG Maxi柱上放置5分钟,以确保洗脱缓冲液被柱膜*吸收。
-标准体积为0.75~1.5ml。如果需要更高的DNA产量,重复DNA排出步骤(步骤11),以提高DNA恢复。
4,000×g离心2分钟,以逃避总DNA。
程序:(用于培养细胞DNA的提取)
将多达1×108个细胞转移到50毫升离心管(未提供)。4,000~6,000 x g离心5 min,使细胞颗粒化。(如果使用贴壁细胞,则在Harv之前将细胞胰蛋白酶化。 besting1。[口]打败,胜过( best的现在分词 )
用10毫升PBS刺激细胞。
从第4步开始遵循血液协议。
发现并修理故障,解决纷争
Possible reasons |
Solutions |
Low or no yield of genomic DNA |
|
Poor cell lysis |
|
Poor cell lysis because of insufficient Proteinase K activity |
Repeat the extraction procedure with a new sample. Use a fresh or well-stored Proteinase K stock solution. |
Poor cell lysis because of insufficient mixing with FABG buffer |
Repeat the extraction procedure with a new sample. Mix the sample and FAGB Buffer immediately and thoroughly by pulse-vortexing. |
Poor cell lysis because of insufficient incubation time |
Repeat the extraction procedure with a new sample. Extend the incubation time and make sure that no residual particulates remain. |
Ethanol is not added into the lysate before transfer- ring into FAGB Maxi Column |
Repeat the extraction procedure with a new sample. |
Incorrect preparation of Wash Buffer |
|
Ethanol is not added into W1 and Wash Buffer when first |
Make sure that the correct volumes of ethanol (96- 100 %) is added into W1 and Wash Buffer when first open. Repeat the extraction procedure with a new sample. |
The volume or the percent- age of ethanol is not correct before adding into W1 and Wash Buffer |
Make sure that the correct volumes of ethanol (96- 100 %) is added into W1 and Wash Buffer when first open. Repeat the extraction procedure with a new sample. |
Possible reasons |
Solutions |
||||
Elution of genomic DNA is not efficient |
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pH of water elution is acidic |
(ddH2O) |
for |
Make sure the pH between 7.5- 9.0. |
of ddH2O |
is |
Use Elution Buffer elution. |
(provided) |
for |
|||
Elution Buffer or ddH2O is not completely absorbed by column membrane |
After Elution Buffer or ddH2O is added, stand the FAGB Maxi Column for 5 min before centrifuga- |
||||
Column is clogged |
|||||
Blood sample contains clots |
Repeat the extraction procedure with a new sample. Mix the blood sample well with anti-coagulant to prevent formation of blood clots. |
||||
Sample is too viscous |
Reduce the sample volume. |
||||
Degradation of elutated DNA |
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Sample is old |
Always use fresh or well-stored sample for genomic DNA extraction. |
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Buffer for gel electrophoresis contaminated with DNase |
Use fresh running buffer for gel electrophoresis. |
基因组DNA提取血液DNA Mini / Midi / Maxi试剂盒
FABGK 000 |
FavorPrep™血液/培养细胞基因组DNA提取迷你试剂盒 |
4个准备。 |
蛋白酶K粉末 |
在室温(15~25℃)下保存2年。 |
FABGK 001 |
50个准备。 |
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FABGK 001-1 |
100个准备。 |
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FABGK 001-2 |
300个准备。 |
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FABGK 100 |
FavorPrep™血液/培养细胞基因组DNA提取迷你试剂盒 |
100个准备。 |
RBC裂解缓冲液 FATL缓冲液 FABG缓冲液 W1缓冲液 洗涤缓冲液(浓) 洗脱缓冲液FABG迷你柱 2ml收集管
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在室温(15~25℃)下保存2年。 |
FABGK 300 |
300个准备。 |
FABGK 002-S |
FavorPrep血液/培养细胞基因组DNA提取Midi试剂盒 |
2个准备。 |
蛋白酶K粉末 |
在室温(15~25℃)下保存2年。 除蛋白酶K粉外,贮存于4℃。 |
FABGK 002 |
20个准备。 |
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FABGK000-MAXI |
FavorPrep™血液/培养细胞基因组DNA提取Maxi试剂盒 |
2个准备。 |
Proteinase K Powder |
在室温(15~25℃)下保存2年。 |
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