Amplite 比色超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒 增强灵敏度

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简要概述

        Amplite 比色超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测超氧化物歧化酶的试剂盒，超氧化物歧化酶（SOD）是一类催化超氧化物歧化成氧和过氧化氢的酶。超氧化物是细胞中主要的活性氧物质之一。它与神经退行性疾病，缺血再灌注损伤，动脉粥样硬化和衰老相关。 SOD是几乎所有暴露于超氧自由基的细胞的重要抗氧化防御剂。事实上，缺乏SOD1的小鼠会发展出多种病理，包括肝细胞癌，加速年龄相关的肌肉质量减少，早期白内障发病率和寿命缩短。 SOD的过表达保护小鼠纤维肉瘤细胞免于凋亡并促进细胞分化。 Amplite 比色超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒为测量SOD活性提供了一种快速而灵敏的方法。众所周知，NADH和SOD酶系统产生超氧自由基，将WST-1还原成蓝色甲dye染料，其在440nm附近具有吸收。 SOD通过催化超氧阴离子歧化成过氧化氢和分子氧来抑制WST-1的还原，从而降低了甲product产物的440nm吸收。 440nm吸收的减少与SOD活性成比例。该试剂盒可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备并添加SOD标准品或测试样品（50μL）
2.添加SOD工作溶液1（25μL）
3.添加SOD工作溶液2（25μL）
4.在室温下孵育30-60分钟
5.监测440nm处的吸光度

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1SOD标准溶液（10 kU / mL）：
将50μL测定缓冲液（组分E）加入到SOD标准品（组分D）的小瓶中以制备10kU / mL标准溶液。

2.标准溶液配制
将10μL10kU / mL SOD标准溶液加入990μL分析缓冲液（组分E）中，得到100 U / mL SOD标准溶液（SD1）。 取100 U / mL SOD标准溶液（SD1），在分析缓冲液（组分E）中进行1:10，得到10U / mL SOD标准溶液（SD2）。 取10 U / mL标准溶液（SD2）并进行1：3连续稀释，以获得使用分析缓冲液（组分E）的连续稀释的SOD标准品（SD3-SD7）。

3.工作溶液配制

3.1 SOD工作溶液方案1：
将2.5mL测定缓冲液（组分E）加入WST-1瓶（组分A）中并充分混合。 然后将50μL50XSOD酶溶液（组分B）加入该瓶中以制备SOD工作溶液1.注意：该SOD工作溶液1应在实验前制备，并避光。 SOD工作溶液1不稳定，应丢弃未使用的部分。

3.2 SOD工作溶液方案2：
将50μL测定缓冲液（组分E）加入到NADH小瓶（组分C）中并充分混合。 然后，将50μL的NADH储备溶液转移到2.5mL测定缓冲液（组分E）中以制备SOD工作溶液2。

操作步骤

表1.透明底96孔微孔板中SOD标准品和测试样品的布局。

SD = SOD标准品（SD1  –  SD7,100至0.041 U / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备SOD标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向SOD标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入25μLSOD工作溶液1，使总测定体积为75μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入12.5μLSOD工作溶液1，总体积为37.5μL/孔。

3.向SOD标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入25μLSOD工作溶液2，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入12.5μLSOD工作溶液2，总体积为50μL/孔。

4.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

5.用吸光度板读数器在440nm处监测吸光度。

数据分析

        将从空白标准孔获得的读数（抑制％）用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算SOD样本。 

图1.使用Amplite 比色超氧化物歧化酶测定试剂盒在96孔白壁/透明底板中用Spectrum Max酶标仪（Molecular Devices）测量OD剂量响应。