ACCUTASE细胞消化液的主要特点和操作流程

ACCUTASE细胞消化液的主要特点和操作流程

  ACCUTASE细胞消化液是一种用于细胞培养过程中分离贴壁细胞的酶溶液。含有多种蛋白酶,能够有效地降解细胞间的蛋白质,从而使贴壁细胞脱离培养容器的表面,便于进行细胞传代、计数或实验分析。主要作用是降解细胞间以及细胞与培养容器表面之间的蛋白质粘附分子,如细胞外基质蛋白和细胞黏附分子。这些蛋白酶能够识别并切割特定的肽键,从而破坏细胞间的连接,使细胞能够从培养容器表面脱落,达到分离细胞的目的。
 

 

  ACCUTASE细胞消化液的主要特点:
  1.温和性:相对于传统的胰酶(Trypsin-EDTA)消化液,ACCUTASE通常更为温和,对细胞的伤害较小,尤其适用于对细胞状态要求较高的实验。
  2.广谱性:ACCUTASE能够作用于多种类型的细胞,包括上皮细胞、成纤维细胞等,应用范围广泛。
  3.高效性:ACCUTASE的消化效率较高,能够在较短的时间内实现细胞的有效分离。
  4.无EDTA:与传统的胰酶消化液不同,ACCUTASE中不含EDTA,因此不需要担心EDTA对细胞的潜在影响。
  应用领域:
  1.细胞培养:用于细胞的传代、分瓶、计数等常规操作。
  2.细胞生物学研究:在进行细胞迁移、侵袭、克隆形成等实验前,需要将细胞从培养皿中分离出来。
  3.组织工程:在构建组织工程支架时,需要将细胞从原组织中分离出来。
  4.临床应用:在某些细胞治疗或检测中,需要将细胞从患者体内分离出来进行体外培养。
  ACCUTASE细胞消化液的操作流程:
  1.观察细胞:在开始消化前,先在显微镜下观察细胞的生长状态,确保细胞适合进行消化。
  2.清洗细胞:用生理盐水或PBS缓冲液清洗细胞,去除培养基中的血清和抗生素,以免影响消化效果。
  3.添加消化液:向培养容器中加入适量的细胞消化液,覆盖细胞表面。
  4.孵育:将培养容器放入培养箱中孵育一段时间,时间根据细胞类型和密度而定。
  5.观察分离:在显微镜下观察细胞是否已经从容器表面脱落,变成圆形悬浮状态。
  6.中和消化:加入含血清的培养基以中和消化液的作用,终止消化过程。
  7.收集细胞:用移液器轻轻吹打细胞,使其全脱落,然后将细胞悬液转移到离心管中。
  8.离心:通过离心收集细胞沉淀,弃去上清液。
  9.重悬:用新鲜培养基重悬细胞,进行后续实验或重新接种培养。

proaxsis PA004-1操作指南

proaxsis PA004-1操作指南

proaxsis PA004-1操作指南

NEATstik®(10盒)

PA004-1(单个试剂盒)和PA004-10(10个试剂盒)

NEATstik®是一项快速的即时护理测试,可以监测痰液样本中活性中性粒细胞弹性蛋白酶的水平。

NEATstik®通常以10个测试盒的形式提供。如果需要,可以提供单项测试,费用为£28英镑,另加运费和增值税(如果有)

 

  1. 预期用途

NEATstik®是一种一次性体外诊断试剂,用于定性检测痰液样本中的活性中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)。本产品仅供医疗保健专业人士使用。

 

  1. 背景

中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)是一种丝氨酸蛋白酶,储存在中性粒细胞中直至活化和释放。NE有三种形式:作为活性酶、无活性酶原或抑制剂结合酶。活性NE是一种降解酶,在正常生理情况下,参与

在炎症和消除微生物感染中1。然而,在肺部疾病中,当发现高浓度的活性NE时,这种降解能力引起过度的组织降解,损伤气道壁有助于破坏性和恶性的炎症周期2。

痰中的活性NE是感染和炎症的已确定生物标志物,与炎性肺病的感染严重程度相关,包括但不限于囊性纤维化(CF)、慢性阻塞性

肺部疾病(COPD)和支气管扩张症3-5。持续监测痰液中这种临床上有用的生物标志物可能有助于这些肺部疾病的管理。

  1. 试验原理

NEATstik®利用ProteaseTag®技术特异性检测痰液样本中的活性NE。

NEATstik®由封装在塑料盒内的侧流试纸组成。试纸条由膜和垫组成,置于固体载体上,应用结合物和两条反应线:供试(T)线和对照线

(C)线。结合物是ProteaseTag®(旨在与活性NE特异性相互作用)和有色金颗粒的混合物。供试(T)细胞系由可检测NE的抗体和对照(C)细胞系可检测结合物组成。

样品稀释后,向NEATstik®的样品端口加入小体积,开始检测过程。稀释样本沿试纸移动,并与结合物相互作用。结合物中的ProteaseTag®将与样本中存在的活性NE结合,沿试纸上行并与供试品结合

(T)线。过量结合物将与对照(C)线结合。

检测线的外观确认了样品中存在的活性NE高于预先设定的阈值。

质控线的外观证实检测正确进行。

  1. 试剂盒组分

每个复合包装盒包含10个套件。

每个试剂盒包含:

密封箔袋中的1×NEATstik®侧流检测

1 xNEATstik®样本稀释缓冲液(20 mL)1 x痰液稀释罐

1 x双球吸管1 x刻度吸管1 x说明书

 

需要但未提供的材料

痰液收集罐称量秤或天平秒表/计时器

  1. 试验程序

收集样品

采集样本进行检测时,要求患者将痰液(不是唾液)咳入痰液采集壶(未提供)。建议立即检测样品。

样品制备

加入NEATstik®前,必须稀释痰液样本。

  1. 将痰液稀释罐的底部放在称量天平上。称量天平去皮重(零)。
  1. 将痰液稀释罐保持在称量天平上,使用抹刀(连接在痰液稀释罐的盖子上)将1-2 g痰液从痰液收集罐中转移到痰液稀释罐中。
  2. 记录转移痰液的重量(g)。痰液稀释罐应保持在称量天平上。
  3. 使用以下计算公式计算NEATstik®样品稀释缓冲液产生10倍稀释所需的量:

痰液重量 = g

x 9

= g NEATstik®

样品稀释缓冲液

  1. 称量天平去皮重(零)。
  2. 使用刻度移液管,将NEATstik®样本稀释缓冲液转移至痰液稀释罐中,直至计算重量。
  3. 将盖子放在痰液稀释罐上,并确保其拧紧。
  4. 倒置痰液稀释槽,使痰液与缓冲液混合

10次。

  1. 检测方法(续)

执行测试

  1. 从铝箔包装中取出NEATstik®,置于水平面上,观察窗朝上。
  2. 取下痰液稀释罐的盖子。
  3. 使用双球吸管吸取稀释痰液样本。尽量确保

读取结果和质量控制

如果检测成功完成,对照(C)线将以红线显示(颜色强度可能不同)。如果质控(C)线不可见,则结果无效,应使用新样本和新的检测试剂盒重复检测。

如果TEST(T)线可见,则确认痰液样本中存在大于预设阈值的活性NE。

  1. 性能特征

使用58份冷冻痰液样本评估NEATstik®检测的性能。使用ProteaseTag®Active NE免疫测定法(ProAxsis Ltd)定量测定活性NE。

  • 42份样本有痰液NE浓度

< 8µg/mL = 阴性

  • 16份样本有痰液NE浓度

> 8µg/mL = 阳性

该检测对16份NE定量高于8µg/mL的痰液样本中的16份给出了阳性结果(100%灵敏度),对42份NE定量低于8µg/mL的痰液样本中的36份给出了阴性结果(86%特异性)。

 

  1. 使用限制

仅用于稀释痰液样本

为获得准确结果,请遵循提供的说明

NEATstik®结果必须结合其他临床和患者进行评价

  1. 处置

痰液样本和使用的检测组分具有潜在生物危害性。根据当地临床废物指南适当处置使用过的检测试剂盒和痰液样本。

 

  1. 参考文献
  1. Pham,C.(2008)International Journal of Biochemistry&Cell Biology,40(6-7),1317-1333.
  2. Sandhaus,R.&Turino,G.(2013)COPD,10(S1):60-63.
  3. Sagel,S. et al(2012)American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine,186(9):857-865
  4. Mayer-Hamblett,N. et al(2007)美国呼吸与重症医学杂志,175:822-828
  5. Chalmers,J.D. et al(2016)American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine 195:1384–1393.


 

仅溶液-无痰液“结块”。

医疗保健专业人员可获得的数据。

NEATstik®不能定量痰液样本中的活性NE。


 

 

  1. 定量活性中性粒细胞弹性蛋白酶
  1. 将样品应用于NEATstik®上的椭圆形样品端口。

 

  1. 读取结果前,等待10 min(使用定时器)。

 

如果TEST(T)线不可见,痰液样本中存在的任何活性NE均不超过预设阈值。

 

  1. 故障排除

未出现对照(C)线

试验无效。使用新套件重复。

 

  1. 警告和注意事项

请勿使用超过有效期的组件

请勿混合不同试剂盒批次的组分

本检测仅供一次性使用。请勿重复使用

处理痰液样本和进行检测时,应穿戴合适的防护

 

  1. 储存

在室温下储存试剂盒。

如果在推荐的储存条件下,每个检测试剂盒仍保存在原始包装中,则可使用至标签上打印的失效日期。

从密封袋中取出后,应立即使用NEATstik®侧流试验。

NEATstik®样本稀释缓冲液应在开瓶后立即使用。

 

ivychem NaI法提取DNA 操作说明

货号:B48202

品名:DNA Extraction EZ-Kit (Sodium Iodide Method)(DNA提取试剂盒(NaI法))

储存:4度下两年

 

 

货号

品名

规格

品牌

B48202

DNA Extraction EZ-Kit (NaI Method)

50 Extractions

Ivy Fine Chemicals

 

产品描述和特点:

DNA提取EZ-Kit是一种简化的NaI,可从组织提取物,血液样品,细胞裂解物,蛋白质或生物制药样品中纯化出几微克的DNA。整个过程包括在一个微量离心管中进行两个简单的孵育和离心步骤,而不使用任何有害物质,如苯酚和CHCl3。优化的洗涤剂可在高蛋白浓度下提取DNA,或在必要时增强蛋白酶K消化。纯化的DNA足够纯化许多DNA应用,例如PCR,实时PCR,限制性内切酶消化和克隆,DNA测序或Picogreen荧光染色。

 

试剂盒组成:

100uL糖原溶液

1ml洗涤剂组合液

25ml NaI溶液

30 mL洗涤缓冲液(无酒精)

 

试剂盒不包含:

乙醇(洗涤缓冲液)

异丙醇(用于DNA沉淀)

2ml微复合管(离心或等效的)

微型离心机(离心或等效的)

 

溶液的制备:

q 加70ml乙醇洗涤液和混合

q 加50uL糖原NaI溶液

q 加2uL糖原洗涤液

 

DNA提取程序:

1、每个样品添加500uL或稀释至2 mL微离心管

q 2、加20uL洗涤剂组合液到每管,并轻轻的涡旋

q 3、选项:如果高浓度的蛋白质干扰DNA提取和DNA分析,每个样品中吸取添加20uL消化蛋白酶K(10mg/ml),在60°C, 20min,然后在95°C灭酶 5min

4、加500uL NaI溶液到每个微管中,并轻轻的涡旋

q  5、50°C孵育10分钟

q 6、加900uL异丙醇涡旋

q 7、室温孵化30min

8、离心机12000转15min

9、轻轻倒出或吸出上清液

q 10、添加1.8ml洗涤缓冲液(含酒精),涡旋

11、离心机12000转10min

q  12、轻轻倒出或吸出上清液

q 13、风干DNA

q 14、添加20-60uL水轻轻涡旋溶解DNA

q 15、纯化的DNA可进行PCR、实时定量PCR、酶切、DNA测序、荧光染色法

 

 

流程图:

 

 

 

 

世界*实验材料供应商 Ivy Fine Chemicals上海金畔生物为其中国代理, Ivy Fine Chemicals在一直是行业的*,一直为广大科研客户提供zui为的产品和服务,上海金畔生物一直秉承为中国科研客户带来的产品,的服务, Ivy Fine Chemicals就是为了给广大科研客户带来更加完善的产品和服务,您的满意将是我们zui大的收获

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Ivy Fine Chemicals 是的精细,专业和定制化学品供应商和制造商,适用于广泛的应用。我们的主要产品包括手性化学品,氨基酸,芳香和吡啶卤素,天然提取物和药物原料。这些化学物质广泛应用于生命科学,制药和精细化工行业。我们在散装工业规模和研发实验室规模中提供化学品。

 在世界各地拥有众多成熟的合作伙伴。我们的工厂合作伙伴和工厂主要位于中国东海岸。他们中的大多数都通过了ISO认证。我们在科技成果产业化方面具有较强的竞争力,追求先进创新项目的研究开发。我们拥有先进的生产设备,在我们的研发中心,千实验室,试点和商业批量生产设备。我们在美国的销售和营销办事处确保为客户提供的客户服务。

 

Glycotech 平行板流室操作说明书

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GlycoTech始建于1991年,是美国国内的专注于糖复合物生物功能和医疗应用研究的生物公司。该公司建立有自己的研究项目,并开发了大量知识产权组合。另外,利用多年来发展的产品业务,GlycoTech建立了zui大的稀有糖类试剂和相关技术的数据库之一。

GlycoTech在过去的六年中一直与诺华制药公司(Novartis)维持着企业合作关系,目的在于共同开发一类可作为强效拮抗剂的糖配体小分子模拟物,这些模拟物能抑制移植诱导的再灌注损伤中发生的血液淋巴细胞的异常外渗现象。近期与Chiron公司签订了许可协议,允许其范围销售Glycotech专有的以抗糖类肿瘤标记物为基础的癌症诊断方面的产品。不仅如此,与国家卫生研究院,宾夕法尼亚大学,罗彻斯特大学和芝加哥神经外科和神经学科研研究院的合作项目也逐一得到开展。

GlycoTech正积极寻找其他的制药合作公司,可着重提供糖生物领域的一系列专业技术。GlycoTech公司的结构和发展策略都非常适合合作者快速得到*的专业知识,并且可以避免承担因公司内部发展引发固有财政责任的相关义务。

 

 

 

平行板流动室中的动态流动分析

流动检测可以在明确的壁面切应力下观察细胞粘附。细胞粘附的不同事件的可视化可以通过选择性图像采集和随后的图像处理来量化。流动测定法特别适合于研究粘附事件,该事件在比大多数静态粘附测定法更短的时间范围内发生得非常快。另外,可以研究初始事件之后的事件,例如细胞稳定和扩散,从而给出特定细胞 – 细胞或细胞 – 基底粘合剂行为的动力学的一些洞察。

 材料:

显微镜:

 

倒相显微镜配置为相衬和荧光操作

物镜(6.3 x,10 x,40 x)

阶段孵化器

生物:

 

细胞悬液(嗜中性粒细胞,癌细胞)

在35mm培养皿中的细胞单层或涂覆的基质

粘附介质(含有12mM Hepes的无血清培养基)

纤连蛋白(人血浆)

牛血清白蛋白(BSA)

流室系统:

 

带密封垫和管件的流量室甲板

35毫米组织培养皿

哈佛注射泵

适用于泵的玻璃注射器(3,5,20或60 cc)

硅橡胶管

旋塞

真空泵

电脑/电子:

 

数字图像采集和处理系统

显示器

录像机

带控制器的CCD相机

时间日期发生器

计算机与图像系统的接口

存储设备的图像

 

操作过程:

一、细胞单层制备

1.通过向每个培养皿中加入1ml5.5μg/ ml FN溶液来涂覆人纤连蛋白(FN)培养皿。

2.孵育30分钟。在室温下。

3.从每道菜中吸出溶液。

4. 根据达到汇合所需的时间,以0.5-3.0×10 5个细胞/ ml的接种密度向每个培养皿中加入2ml细胞悬浮液(Huvecs,CHO细胞)。

5. 1-5天后,在流动测定中使用具有融合单层的培养皿。饲养细胞每2-3天,但通常不48小时。的流量测定。

二、涂层基板制备

1.用标记笔在每个盘的中心划出用于涂布基材的涂布区域(5mm直径)。

2.加入20μl含10μg/ ml浓度底物的溶液至涂层区域。孵育1小时。

3.吸出液体,加入20μl1%BSA封闭1小时。

4.吸走BSA,加入20μl抑制剂1小时。

5.菜肴已准备好用于流动测定。

三、使用平行板流动室的流动分析

1.打开阶段培养箱和温热粘合介质至37°C 1小时。在开始流动测定之前。

2.将进口,出口和真空管路连接到流动室甲板上的流动系统装置。用介质填充系统并去除系统中的所有空气。

3.用细胞悬液填充入口储液器。对于使用细胞单层的测定,推荐10 6个 细胞/ ml。对于涂布的底物测定,使用10 5个细胞/ ml。

4.通过倒转甲板将碟子安装到流动室甲板上,在流道区域放置一小块培养基,然后将35毫米培养皿放在甲板上。真空将在甲板上举行。确保碟子在流路中没有气泡。

5.将组装好的腔室放在显微镜台上。

6.启动细胞的流式细胞注射器连接在0.1-4.0达因/厘米的范围内的剪切应力至出口流动室泵2

7.让细胞流动足够的时间以获得足够数量的细胞与细胞单层或涂布的表面相互作用。一般3-10分钟。用来。

8.开始图像采集。在盘子上7-10个位置收集图像。通常,在给定实验条件下的3个盘子提供足够的数据以显示处理之间的统计差异。

9.在所有盘上获取图像后,执行图像分析以量化流动测定。

 

 

 

 

货号

品名

规格

目录价

品牌

31-001

Circular Flow Chamber Kit

1 kit

10,800

Glycotech

 

 

tncbio XerumFree操作说明书

tncbio XerumFree操作说明书


XerumFree易于使用:

只需像使用FBS(通常为10%)一样将XerumFree添加到培养基中即可。要从含FBS的培养基转变为含XerumFree的培养基,我们建议按照使用手册(可根据要求提供,或从我们的网站下载)中所述的步骤进行细胞断奶

在无干燥浓缩培养基上成功培养的细胞示例:

•肝上皮细胞•HaCaT

•原代人肝细胞•杂交瘤

•维罗•HEK293

•CHO•HEP G2

•HeLa•等。

•人类角质形成细胞

 


Catalog number      Volume                  Product

XF212-0100           100 ml                    XerumFree

XF212-0500           500 ml                    XerumFree

XF212-xxxx           on request / customized XerumFree

defined cellculture

XerumFree™ XF212 Medium Supplement.

完整定义、无动物成分的细胞培养补充剂。

在没有血清的情况下进行细胞培养可能很有挑战性。然而,这些回报在很大程度上是对这些努力的回报,重新发现细胞培养的基础很快发展成为一种激情。本文的目的是引导用户顺利过渡到无血清状态,并避免所有不充分或不适当的努力。

理想情况下,向无血清条件的转化应进行多次传代,以逐渐选择可在无血清条件下生长的细胞。然而,如果所有关键方面都得到适当解决,直接适应无血清环境也可能成功。

无论采用何种方法,关键问题包括细胞接种物的生长状态、细胞接种密度、亚培养技术和细胞培养系统的生物物理属性。

TNCbio的XerumFree™ 血清替代物的设计目的是以与传统细胞培养血清相同的方式使用,作为培养基补充。

使用浓缩防静电剂前的重要注意事项™ XF212:

-XF212是一种替代血清的细胞培养基添加剂,

 

Noviocell NCS01操作说明书

 

 

 

Noviocell NCS01操作说明书

syntrix-P kit

Quantity: 10 ml 
Catalog number: NCS01

Syntrix-P是一种合成基质,可用于为各种基于细胞的测定法创建定义的3D微环境。Syntrix-P已被低聚乙二醇部分官能化,从而为细胞提供了低粘附力的表面。

描述

 

syntrix-p试剂盒使用指南

syntrix-p是一种合成基质,可用于为各种基于细胞的分析创建定义的三维微环境。syntrix-p已被低聚乙二醇部分功能化,从而呈现出与细胞的低粘附表面。在细胞培养基存在下,syntrix-p自组装成水凝胶,水凝胶呈现纳米纤维结构,类似于天然的细胞外基质。已发现所得水凝胶支持各种细胞系(如3T3、HepG2、MDCK和CaCO-2)和原代细胞(如HUVEC、HADSC和HESC)。

工具包内容

Syntrix-P Kit                                                                     Amount

Syntrix-P (Solution A)*                                                   2 x 1.65 mL

Hyaluronic acid (Solution B)*                                          1 x 1.5 mL *

 

Store at -20o C

 

一般考虑

•仔细检查解冻溶液A后是否有任何沉淀。如有必要,通过上下数次移液管重新溶解任何沉淀。

•解冻后,取适当体积的等分溶液A,以避免多次冻融循环。此外,将溶液A在室温下的时间保持在低限度,即在进行实验后立即将其放回-20°C。

•syntrix-p可用于3-9mg/ml的终基质浓度范围。

表1中的体积导致终的基质浓度为5 mg/ml,为特定应用的优化提供了良好的起点。由于不同的细胞类型可能需要不同的浓度,我们参考了文件协议中其他浓度所需的体积

•当在96孔板1 syntrix-p试剂盒中以5 mg/ml的浓度和每孔60微升的体积使用时,可为约2.5个96孔板提供足够的基质。

•Syntrix-P溶液呈酸性(pH 2-2.5)。包封后,凝胶的ph值将在6.5-7.5之间。ph值随后将与添加的介质平衡

通过细胞培养基中存在的缓冲液中和SyTrIX-P的凝胶化,并在混合时立即开始。因此,“细胞悬浮液+溶液B”与“SyTrIX-P”(溶液A)的混合是非常重要的,但要快速而小心地进行(避免引入气泡)。我们建议在混合时直接开始电镀,因为部分形成的凝胶的破坏会对终凝胶完整性产生负面影响。

•细胞在syntrix-p中培养,浓度范围为4*104-2.5*107细胞/ml。需要滴定法来确定实验的宜细胞密度。

高通量实验的一个很好的起点是以每毫升凝胶4*104–2*105个细胞的密度对细胞进行平板化。

•在电镀后的0.5-2小时内,使用带有酚红pH指示器的细胞培养基制备的基质将颜色从三文鱼色变为浅粉色。syntrix-p与所有标准培养基兼容。

•重要的是尽量减少气泡的形成,因为终凝胶中存在气泡会干扰气泡与井的连接。

•为了填充更多的井,建议使用多通道吸管。

•Syntrix-P矩阵随着时间的推移透明度增加。为了获得更高的光学透明度,使用较低的凝胶体积,因为这将降低凝胶的光吸收率。

•syntrix-p是一种*定义的合成基质,与基底膜提取物相比,不含可溶性生长因子或细胞因子。为了获得宜的细胞生长和分化,可能需要向培养基中添加生物活性分子(如生长因子、细胞因子等)。