rndsystems Cultrex 低生长因子基底膜提取物说明书
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Cultrex 低生长因子基底膜提取物
Cultrex 低生长因子基底膜提取物，2 型，Pathclear
对于稳健的类器官培养 – 低生长因子基底膜提取物
Cultrex 低生长因子基底膜提取物，2 型，Pathclear 摘要
Cultrex 低生长因子基底膜提取物 (RGF BME)，2 型特别有资格支持稳健类器官培养的建立和扩展。它的成分模拟体内微环境，以提高类器官的摄取率和生长。
主要优势
• 有资格用于类器官细胞培养
• 常用的稳健和成熟的类器官系统
• 减少生长因子配方提供更明确的培养系统
• 质量控制以确保性能一致性
为什么使用 Cultrex RGF BME，类型 2？
Cultrex 低生长因子基底膜提取物 (RGF BME)，2 型是从 Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 肿瘤中纯化的基底膜的可溶性形式。这种提取物提供了一种天然细胞外基质水凝胶，可在 37°C 下聚合形成重建的基底膜。基底膜是连续的特殊细胞外基质片，形成内皮细胞、上皮细胞、肌肉细胞或神经元细胞与其相邻基质之间的界面，并通过影响细胞粘附、迁移、增殖和分化在组织组织中发挥重要作用。BME 的主要成分包括层粘连蛋白、IV 型胶原蛋白、内联蛋白和硫酸乙酰肝素蛋白聚糖。
Cultrex RGF BME, Type 2 提供了一种专有配方，具有高拉伸强度，专为稳健的组织类器官培养以及需要细胞外基质支架的其他应用而设计。
使用 Cultrex RGF BME，2 型进行类器官细胞培养的方案。
Cultrex RGF BME，2 型非常适合用作类器官和 3D 细胞培养的支架。下面列出的是我们的研发团队为类器官培养设计的方案，其中包含 Cultrex RGF BME、2 型以及来自 Bio-Techne 的生长因子、培养基补充剂和小分子。
规格
来源
鼠 Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 肿瘤
蛋白质浓度
8-12 mg/mL 由 Lowry 测定确定
内毒素水平
≤ 8 EU/mL 鲎变形细胞裂解物 (LAL) 测定
测试细胞培养
类器官培养– Cultrex RGF BME，2 型支持小鼠小肠类器官祖细胞的生长和扩增。
凝胶测定– Cultrex RGF BME，2 型在 37 °C 下在不到 30 分钟内凝胶，并在培养基中在 37 °C 下保持凝胶形式至少 14 天。
圆顶检测Cultrex RGF BME，2 型在细胞培养板上形成并保持稳定的 3-D 圆顶结构。
管形成分析– Cultrex RGF BME，2 型支持人（HBMVEC；HUVEC）或小鼠（SVEC4-10）内皮细胞形成毛细血管样结构。
病毒检测
总共 31 种生物体和病毒的 PCR 检测结果为阴性，包括：支原体、17 种通常包含在小鼠抗体生产 (MAP) 检测中的细菌和病毒株，以及 13 种额外的鼠传染性病原体，包括 LDEV。
稳定
产品在 ≤ -70 °C 下储存时，自生产之日起至少两年内是稳定的。有关有效期，请参阅批次特定的分析证书。
运输条件
产品随附干冰或等效物。收到后，立即将其存放在产品标签上建议的温度下。
贮存
将未开封的产品储存在 -70 °C。使用手动除霜冷冻机，避免重复冻融循环。
限制
仅供研究使用。不用于诊断用途。
数据示例
使用 2 型 Cultrex RGF BME 培养的人类肠道类器官。使用 分别从横结肠和回肠活检组织中分离的细胞培养 人类横结肠类器官(A、B)和人类回肠类器官(C、D)。类器官作为支架基质嵌入 Cultrex RGF BME，2 型。A) 人体横向类器官的明场图像。B) 使用山羊抗人/小鼠 E-钙粘蛋白抗原亲和纯化的多克隆抗体（绿色；目录编号AF748）、MUC2 抗体（红色；目录编号NBP2-44431）和 DAPI（蓝色）染色的人横向类器官 。C） 人类回肠类器官的明场图像。D) 使用醛缩酶 B 抗体（红色；目录号NBP2-15345）、人钙粘蛋白-17 抗体（绿色；目录号MAB1032和 DAPI（蓝色）染色的人回肠类器官。
在 2 型 Cultrex RGF BME 中形成 HepG2 球体。 通过将 HepG2 肝肝癌细胞（每孔 10,000 个细胞）铺在涂有 5 mg/mL Cultrex RGF BME 2 型的 24 孔板中形成肝细胞球体。在通过明场显微镜成像前培养 21 天。
在 2 型 Cultrex RGF BME 中 培养的小鼠肠道类器官。在 2 型 Cultrex RGF BME 中培养的小鼠肠道类器官被浸没固定并处理以进行整体染色或石蜡包埋和切片以进行免疫细胞化学。A)使用山羊抗人/小鼠 E-钙粘蛋白抗原亲和纯化的多克隆抗体（绿色；目录编号AF748）在室温下以 10 µg/mL染色整个小鼠肠道类器官3 小时。细胞用 DAPI（蓝色）复染。B)石蜡包埋的小鼠肠道组织，针对人钙粘蛋白-17 抗体（绿色；目录号MAB1032）、人 Ki67/MKI67 抗体（红色；目录号AF7617）进行染色），并用 DAPI（蓝色）复染。
Cultrex RGF BME 中肝脏类器官的形成和分化，2 型。 人肝脏类器官来源于人活检组织。未分化的类器官是通过将分离的组织嵌入 Cultrex RGF BME 2 型并在专门培养基中培养而形成的。使用含有重组人 FGF-19（货号 # 969-FG）、DAPT（货号 # 2634）和地塞米松（货号 # 1126）的培养基区分类器官。A)未分化的肝脏类器官。B)肝脏类器官在分化时会缩小。C） 分化的肝脏类器官表达肝细胞标志物、白蛋白和 HNF3 β 以及 E-钙粘蛋白的代表性图像。
人肺类器官培养在Cultrex BME RGF，类型2 A）人肺类器官的代表性图像明使用Cultrex BME RGF，类型2中培养B）的Sox2（绿色的表达;目录号AF2018）和乙酰化微管蛋白（红色; Novus公司生物制品，目录号NB600-567）。C) p63/TP73L（绿色；目录# AF1916）和细胞角蛋白10（红色；Novus Biologicals，目录# NBP2-61736）的表达。D)Podoplanin（绿色；目录号AF3670）作为 1 型肺泡细胞标志物的表达。
