Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒 绿色荧光 适合于流式细胞检测

简要概述

        Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞周期的试剂盒，Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。在正常细胞中，DNA密度的改变与细胞生长、分化、休眠等细胞功能相关。细胞周期通过许多不同的细胞周期调控因子相互作用来调节。这些调控因子的激活因子，可以与DNA结合，开启或关闭那些能引起细胞分裂的蛋白质。在这个调控级联反应中，任何一步的错误都会引起细胞非正常地增殖，这是一种潜在的病理状态，例如肿瘤的形成。活细胞研究的潜在应用是对细胞DNA含量的测定和细胞周期进行检测，为了对细胞的生长模式的变化进行检测，对细胞凋亡进行监测，对肿瘤细胞活动和抑制剂基因机制进行研究。Cell Meter荧光法细胞周期检测试剂盒 *绿色荧光 适合于流式细胞检测* 是设计用来检测细胞周期进程和增殖的，在活细胞、经通透性处理的细胞和固定化细胞中使用我们独特的Nuclear Green CCS1对细胞周期进程和增殖进行监测。在所给样品的不同细胞中，有G0/G1, S 和G2/M 期以及细胞凋亡之前的亚-G1期等，可以通过流式细胞仪检测。经过Nuclear Green CC1染色的细胞可以通过流式细胞仪在Ex/Em = 490 nm/520 nm(FL1 通道)进行检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

用测试化合物制备细胞，密度为5×10⁵至1×10⁶个细胞/ mL
将2.5μL200XNuclear Green CCS1加入0.5 mL细胞溶液中
在37°C，5％CO₂培养箱中孵育30-60分钟
使用FL1通道用流式细胞仪分析细胞（（Ex / Em = 490/525 nm）

操作步骤

1.对于每个样品，将细胞制备在0.5 mL温热培养基或您选择的缓冲液中，密度为5×105至1×106个细胞/ mL。注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定诱导细胞凋亡的细胞密度。

2.用测试化合物处理细胞一段所需的时间以诱导细胞凋亡或其他细胞周期功能。

3.将2.5μL的200X Nuclear Green CCS1（组分A）加入处理过的细胞中。

4.将细胞在37°C，5％CO₂培养箱中孵育30至60分钟。注意：对于粘附细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在与Nuclear Green CCS1孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。由于Nuclear Green CCS1是细胞可渗透的，因此不必在DNA染色前固定细胞。

5.可选：将细胞以1000 rpm离心4分钟，然后将细胞重新悬浮于0.5 mL测定缓冲液（组分B）或您选择的缓冲液中。

6.使用具有FL1通道的流式细胞仪（Ex / Em = 490 / 525nm）监测荧光强度。

数据分析

Cell Meter 磷脂酰丝氨酸凋亡检测试剂盒 红色荧光,适合微孔板检测

简要概述

Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些 的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。Cell Meter磷脂酰丝氨酸凋亡检测试剂盒 *红色荧光,适合微孔板检测*是通过检测PS的翻转来测定细胞凋亡。在凋亡细胞中，PS从胞内移位到胞外表面，因此PS出现在细胞的外表面可以作为细胞凋亡的起始或者中间阶段的通用指示器，也可以通过其形态学改变来测定。该试剂盒使用我们独有的红色荧光Apopxin PS传感器特异性的结合PS，其亲和性高于Annexin V(Kd<10nM)。该试剂盒使用的PS传感器结合膜上的PS后，发出红色的荧光。因为与PS的高亲和性，该试剂盒比其它基于Annexin-V，仅能用荧光显微镜和流式检测凋亡的试剂盒更稳定，并且本试剂盒除上述两种仪器外还能使用荧光酶标仪。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物制备细胞（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）
2.加入等量的Apopxin™Red工作溶液
3.在室温下孵育1小时
4.监视Ex / Em = 590/630 nm（截止= 610 nm）的荧光强度（底部读取模式）或使用带有Texas Red滤光片的荧光显微镜

溶液配制

工作溶液配制

将10 µL Apopxin™Red（组分A）加入1 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成Apopxin™Red工作溶液。

操作步骤

1.通过向PBS或所需的缓冲液中加入10X /孔（96孔板）或2.5 µL /孔（384孔板）的10X测试化合物储备溶液来处理细胞。 对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相同量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在5％CO2、37°C的培养箱中孵育所需的时间（对于喜树碱处理过的Jurkat细胞，需要4-6小时）以诱导凋亡。

3.在每个孔中加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Apopxin™Red工作溶液。

4.在避光条件下，于室温下孵育细胞板至少1小时。

5.以800 rpm的速度离心细胞板（特别是非粘附细胞）2分钟（制动）。

6.使用荧光酶标仪（Ext / Em = 590/630 nm（截止= 610 nm））或使用带有TexasRed®滤光片的荧光显微镜对图像池进行荧光强度监测。

图示

图1.用Cell Meter™磷脂酰丝氨酸凋亡检测试剂盒染色的Costar黑壁/透明底部96孔板中Jurkat细胞的荧光图像。 不使用（左）或用20μM喜树碱（右）处理Jurkat细胞5小时。 使用具有Texas Red通道的荧光显微镜测量荧光强度。