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iFluor Ultra 594 琥珀酰亚胺酯

	货号	71650	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	1 mg	价格	3612
	Ex (nm)	586	Em (nm)	601
	分子量	1436.72	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

荧光染料缀合抗体是许多应用中鉴定蛋白质的一种工具，包括荧光细胞成像、流式细胞术、蛋白质印迹、免疫组织化学等。使用荧光标记抗体的优势包括的灵敏度、多路复用能力和易用性。 iFluor Ultra 系列是我们广受欢迎的 iFluor 染料的升级版，并针对用于荧光成像和流式细胞术应用的标记抗体进行了优化。用 iFluor Ultra 594 制备的抗体缀合物远远优于其他现有类似染料的缀合物，如 Alexa Fluor® 594。iFluor Ultra 594 缀合物在相同条件下比用 Alexa Fluor® 594 制备的缀合物亮。此外，iFluor Ultra 594 的荧光不受 pH (4-10) 的影响。 iFluor Ultra 594 SE 染料相当稳定，并表现出与蛋白质氨基的良好反应性和选择性。 iFluor Ultra 594 的光谱特性和反应性类似于 Alexa Fluor® 594（Alexa Fluor® 是 ThermoFisher 的商标）。

点击查看光谱

产品说明书

实验方案

储备溶液配制

1. 蛋白质原液（溶液 A）
将 100 µL 反应缓冲液（例如，1 M 碳酸钠溶液或 1 M 磷酸盐缓冲液，pH ~ 9.0）与 900 µL 目标蛋白溶液（例如抗体，如果可能，蛋白质浓度 >2 mg/mL）混合，得到 1 mL 蛋白质标记原液。
注意：蛋白质溶液（溶液 A）的 pH 值应为 8.5 ± 0.5。如果蛋白质溶液的 pH 值低于 8.0，则使用 1 M 碳酸氢钠溶液或 1 M pH 9.0 磷酸盐缓冲液将 pH 值调整到 8.0-9.0 的范围内。
注意：蛋白质应溶于1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)，pH 7.2-7.4。如果蛋白质溶解在 Tris 或甘氨酸缓冲液中，则必须用 1X PBS，pH 7.2-7.4 进行透析，以去除用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如硫酸铵和醋酸铵）。
注意：如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL，缀合效率会显着降低。为获得 标记效率，建议 终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。

2. iFluor Ultra 594 SE 原液（溶液 B）
将无水 DMSO 添加到 iFluor Ultra 594 SE 小瓶中，制成 10 mM 储备溶液。通过移液或涡旋混合均匀。
注意：在开始缀合之前准备染料储备溶液（溶液 B），并及时使用。染料原液的长期储存可能会降低染料活性。溶液 B 在避光和防潮的情况下可以在冰箱中储存两周，避免冻融循环。

  

操作步骤

该标记方案是为山羊抗小鼠 IgG 与 iFluor Ultra 594 SE 的缀合而开发的。 您可能需要进一步 您的特定蛋白质。
注意：每种蛋白质需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的特性。 蛋白质的过度标记会对其缀合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。

1.进行缀合反应
1.1使用 10:1 的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）的摩尔比作为起点：将 5 μL 的染料储备溶液（溶液 B，假设染料储备溶液为 10 mM）在有效摇动下倒入蛋白质溶液（95 µL 溶液 A）小瓶中。 假设蛋白质浓度为 10 mg/mL 且蛋白质的分子量为 ~200KD，则蛋白质的浓度为 ~0.05 mM。
注意：我们建议使用 10:1 摩尔比的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）。 如果太低或太高，分别确定 染料/蛋白质比例为 5:1、15:1 和 20:1。
1.2在室温下继续旋转或摇动反应混合物 30-60 分钟。

 

2.纯化缀合物
以下方案是使用 Sephadex G-25 柱进行染料-蛋白质缀合物纯化的示例。
根据制造说明准备 Sephadex G-25 柱。
2.1将反应混合物（来自“1.进行缀合反应”）加载到 Sephadex G-25 列的顶部。
2.2样品刚好在顶部树脂表面下方运行时，立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)。
2.3向所需样品中添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱纯化。 结合含有所需染料-蛋白质偶联物的组分。
注意：要立即使用，染料-蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并分装多次使用。
注意：对于长期储存，染料-蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

 

3.数据处理

3.1表征所需的染料-蛋白质缀合物
取代度 (DOS) 是表征染料标记蛋白质的 重要因素。 较低 DOS 的蛋白质通常具有较弱的荧光强度，但较高 DOS 的蛋白质（例如 DOS > 6）也往往具有较低的荧光强度。 大多数抗体的 DOS 建议在 2 到 10 之间，具体取决于染料和蛋白质的特性。 为了有效标记，应控制取代度，使 6-8 摩尔 iFluor Ultra 594 SE 对 1 摩尔抗体。 以下步骤用于确定 iFluor Ultra 594 SE 标记蛋白质的 DOS。

3.2吸收检测
要检测染料-蛋白质缀合物的吸收光谱，建议将样品浓度保持在 1-10 µM 的范围内，具体取决于染料的消光系数。

3.3读取 280 nm 处的 OD（吸光度）和染料 大吸光度（对于 iFluor Ultra 594 染料，ƛmax = 588 nm）
对于大多数分光光度计，样品（来自色谱柱馏分）需要用去离子水稀释，以便 OD 值在 0.1 到 0.9 的范围内。 OD（吸光度）在 280 nm 是蛋白质的 大吸收，而 588 nm 是 iFluor Ultra 594 SE 的 大吸收。 要获得准确的 DOS，请确保缀合物中不含非结合染料。

3.4计算DOS
您可以通过链接使用我们的工具计算DOS

 

参考文献

A fully integrated isotachophoresis with a programmable microfluidic platform.
Authors: Shebindu, Adam and Somaweera, Himali and Estlack, Zachary and Kim, Jungtae and Kim, Jungkyu
Journal: Talanta (2021): 122039

Effect of VIRP1 Protein on Nuclear Import of Citrus Exocortis Viroid (CEVd).
Authors: Seo, Hyesu and Kim, Kyunghee and Park, Woong June
Journal: Biomolecules (2021)

Liquid Droplet Formation and Facile Cytosolic Translocation of IgG in the Presence of Attenuated Cationic Amphiphilic Lytic Peptides.
Authors: Iwata, Takahiro and Hirose, Hisaaki and Sakamoto, Kentarou and Hirai, Yusuke and Arafiles, Jan Vincent V and Akishiba, Misao and Imanishi, Miki and Futaki, Shiroh
Journal: Angewandte Chemie (International ed. in English) (2021)

MicroRNA-126 inhibits pathological retinal neovascularization via suppressing vascular endothelial growth factor expression in a rat model of retinopathy of prematurity.
Authors: Fan, Yuan-Yao and Liu, Chi-Hsien and Wu, An-Lun and Chen, Hung-Chi and Hsueh, Yi-Jen and Chen, Kuan-Jen and Lai, Chi-Chun and Huang, Chung-Ying and Wu, Wei-Chi
Journal: European journal of pharmacology (2021): 174035

Retinal ganglion cells projecting to superior colliculus and pulvinar in marmoset.
Authors: Grünert, Ulrike and Lee, Sammy C S and Kwan, William C and Mundinano, Inaki-Carril and Bourne, James A and Martin, Paul R
Journal: Brain structure & function (2021)

Fluorescently-labeled fremanezumab is distributed to sensory and autonomic ganglia and the dura but not to the brain of rats with uncompromised blood brain barrier.
Authors: Noseda, Rodrigo and Schain, Aaron J and Melo-Carrillo, Agustin and Tien, Jason and Stratton, Jennifer and Mai, Fanny and Strassman, Andrew M and Burstein, Rami
Journal: Cephalalgia : an international journal of headache (2020): 229-240

Modeling iontophoretic drug delivery in a microfluidic device.
Authors: Moarefian, Maryam and Davalos, Rafael V and Tafti, Danesh K and Achenie, Luke E and Jones, Caroline N
Journal: Lab on a chip (2020): 3310-3321

Cell-based immunofluorescence assay for screening the neurogenesis potential of new drugs in adult hippocampal neural progenitor cells.
Authors: Zhang, Kun and Li, Bin and Li, Peifang and Yang, Xiaoli and Cui, Huixian and Liu, Xiaoyun
Journal: Acta neurobiologiae experimentalis (2019): 302-308

Super blinking and biocompatible nanoprobes based on dye doped BSA nanoparticles for super resolution imaging.
Authors: Zong, Shenfei and Pan, Fengmei and Zhang, Ruohu and Chen, Chen and Wang, Zhuyuan and Cui, Yiping
Journal: Nanotechnology (2019): 065701

[Sepsis impairs aggregation of nicotinic acetylcholine receptors on murine skeletal muscle cell membranes by inhibiting AKT/GSK3β phosphorylation].
Authors: Li, Tianmei and Liu, Li and Wang, Xiaobin
Journal: Nan fang yi ke da xue xue bao = Journal of Southern Medical University (2019): 1337-1343

说明书

iFluor Ultra 594 琥珀酰亚胺酯.pdf

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

iFluor Ultra 594 琥珀酰亚胺酯

	货号	71651	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 ug	价格	1164
	Ex (nm)	586	Em (nm)	601
	分子量	1436.72	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

荧光染料缀合抗体是许多应用中鉴定蛋白质的一种工具，包括荧光细胞成像、流式细胞术、蛋白质印迹、免疫组织化学等。使用荧光标记抗体的优势包括的灵敏度、多路复用能力和易用性。 iFluor Ultra 系列是我们广受欢迎的 iFluor 染料的升级版，并针对用于荧光成像和流式细胞术应用的标记抗体进行了优化。用 iFluor Ultra 594 制备的抗体缀合物远远优于其他现有类似染料的缀合物，如 Alexa Fluor® 594。iFluor Ultra 594 缀合物在相同条件下比用 Alexa Fluor® 594 制备的缀合物亮。此外，iFluor Ultra 594 的荧光不受 pH (4-10) 的影响。 iFluor Ultra 594 SE 染料相当稳定，并表现出与蛋白质氨基的良好反应性和选择性。 iFluor Ultra 594 的光谱特性和反应性类似于 Alexa Fluor® 594（Alexa Fluor® 是 ThermoFisher 的商标）。

点击查看光谱

产品说明书

实验方案

储备溶液配制

1. 蛋白质原液（溶液 A）
将 100 µL 反应缓冲液（例如，1 M 碳酸钠溶液或 1 M 磷酸盐缓冲液，pH ~ 9.0）与 900 µL 目标蛋白溶液（例如抗体，如果可能，蛋白质浓度 >2 mg/mL）混合，得到 1 mL 蛋白质标记原液。
注意：蛋白质溶液（溶液 A）的 pH 值应为 8.5 ± 0.5。如果蛋白质溶液的 pH 值低于 8.0，则使用 1 M 碳酸氢钠溶液或 1 M pH 9.0 磷酸盐缓冲液将 pH 值调整到 8.0-9.0 的范围内。
注意：蛋白质应溶于1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)，pH 7.2-7.4。如果蛋白质溶解在 Tris 或甘氨酸缓冲液中，则必须用 1X PBS，pH 7.2-7.4 进行透析，以去除用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如硫酸铵和醋酸铵）。
注意：如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL，缀合效率会显着降低。为获得 标记效率，建议 蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。

2. iFluor Ultra 594 SE 原液（溶液 B）
将无水 DMSO 添加到 iFluor Ultra 594 SE 小瓶中，制成 10 mM 储备溶液。通过移液或涡旋混合均匀。
注意：在开始缀合之前准备染料储备溶液（溶液 B），并及时使用。染料原液的长期储存可能会降低染料活性。溶液 B 在避光和防潮的情况下可以在冰箱中储存两周，避免冻融循环。

  

操作步骤

该标记方案是为山羊抗小鼠 IgG 与 iFluor Ultra 594 SE 的缀合而开发的。 您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。
注意：每种蛋白质需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的特性。 蛋白质的过度标记会对其缀合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。

1.进行缀合反应
1.1使用 10:1 的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）的摩尔比作为起点：将 5 μL 的染料储备溶液（溶液 B，假设染料储备溶液为 10 mM）在有效摇动下倒入蛋白质溶液（95 µL 溶液 A）小瓶中。 假设蛋白质浓度为 10 mg/mL 且蛋白质的分子量为 ~200KD，则蛋白质的浓度为 ~0.05 mM。
注意：我们建议使用 10:1 摩尔比的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）。 如果太低或太高，分别确定 染料/蛋白质比例为 5:1、15:1 和 20:1。
1.2在室温下继续旋转或摇动反应混合物 30-60 分钟。

 

2.纯化缀合物
以下方案是使用 Sephadex G-25 柱进行染料-蛋白质缀合物纯化的示例。
根据制造说明准备 Sephadex G-25 柱。
2.1将反应混合物（来自“1.进行缀合反应”）加载到 Sephadex G-25 列的顶部。
2.2样品刚好在顶部树脂表面下方运行时，立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)。
2.3向所需样品中添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱纯化。 结合含有所需染料-蛋白质偶联物的组分。
注意：要立即使用，染料-蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并分装多次使用。
注意：对于长期储存，染料-蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

 

3.数据处理

3.1表征所需的染料-蛋白质缀合物
取代度 (DOS) 是表征染料标记蛋白质的 重要因素。 较低 DOS 的蛋白质通常具有较弱的荧光强度，但较高 DOS 的蛋白质（例如 DOS > 6）也往往具有较低的荧光强度。 大多数抗体的 DOS 建议在 2 到 10 之间，具体取决于染料和蛋白质的特性。 为了有效标记，应控制取代度，使 6-8 摩尔 iFluor Ultra 594 SE 对 1 摩尔抗体。 以下步骤用于确定 iFluor Ultra 594 SE 标记蛋白质的 DOS。

3.2吸收检测
要检测染料-蛋白质缀合物的吸收光谱，建议将样品浓度保持在 1-10 µM 的范围内，具体取决于染料的消光系数。

3.3读取 280 nm 处的 OD（吸光度）和染料 大吸光度（对于 iFluor Ultra 594 染料，ƛmax = 588 nm）
对于大多数分光光度计，样品（来自色谱柱馏分）需要用去离子水稀释，以便 OD 值在 0.1 到 0.9 的范围内。 OD（吸光度）在 280 nm 是蛋白质的 大吸收，而 588 nm 是 iFluor Ultra 594 SE 的 吸收。 要获得准确的 DOS，请确保缀合物中不含非结合染料。

3.4计算DOS
您可以通过链接使用我们的工具计算DOS

 

参考文献

A fully integrated isotachophoresis with a programmable microfluidic platform.
Authors: Shebindu, Adam and Somaweera, Himali and Estlack, Zachary and Kim, Jungtae and Kim, Jungkyu
Journal: Talanta (2021): 122039

Effect of VIRP1 Protein on Nuclear Import of Citrus Exocortis Viroid (CEVd).
Authors: Seo, Hyesu and Kim, Kyunghee and Park, Woong June
Journal: Biomolecules (2021)

Liquid Droplet Formation and Facile Cytosolic Translocation of IgG in the Presence of Attenuated Cationic Amphiphilic Lytic Peptides.
Authors: Iwata, Takahiro and Hirose, Hisaaki and Sakamoto, Kentarou and Hirai, Yusuke and Arafiles, Jan Vincent V and Akishiba, Misao and Imanishi, Miki and Futaki, Shiroh
Journal: Angewandte Chemie (International ed. in English) (2021)

MicroRNA-126 inhibits pathological retinal neovascularization via suppressing vascular endothelial growth factor expression in a rat model of retinopathy of prematurity.
Authors: Fan, Yuan-Yao and Liu, Chi-Hsien and Wu, An-Lun and Chen, Hung-Chi and Hsueh, Yi-Jen and Chen, Kuan-Jen and Lai, Chi-Chun and Huang, Chung-Ying and Wu, Wei-Chi
Journal: European journal of pharmacology (2021): 174035

Retinal ganglion cells projecting to superior colliculus and pulvinar in marmoset.
Authors: Grünert, Ulrike and Lee, Sammy C S and Kwan, William C and Mundinano, Inaki-Carril and Bourne, James A and Martin, Paul R
Journal: Brain structure & function (2021)

Fluorescently-labeled fremanezumab is distributed to sensory and autonomic ganglia and the dura but not to the brain of rats with uncompromised blood brain barrier.
Authors: Noseda, Rodrigo and Schain, Aaron J and Melo-Carrillo, Agustin and Tien, Jason and Stratton, Jennifer and Mai, Fanny and Strassman, Andrew M and Burstein, Rami
Journal: Cephalalgia : an international journal of headache (2020): 229-240

Modeling iontophoretic drug delivery in a microfluidic device.
Authors: Moarefian, Maryam and Davalos, Rafael V and Tafti, Danesh K and Achenie, Luke E and Jones, Caroline N
Journal: Lab on a chip (2020): 3310-3321

Cell-based immunofluorescence assay for screening the neurogenesis potential of new drugs in adult hippocampal neural progenitor cells.
Authors: Zhang, Kun and Li, Bin and Li, Peifang and Yang, Xiaoli and Cui, Huixian and Liu, Xiaoyun
Journal: Acta neurobiologiae experimentalis (2019): 302-308

Super blinking and biocompatible nanoprobes based on dye doped BSA nanoparticles for super resolution imaging.
Authors: Zong, Shenfei and Pan, Fengmei and Zhang, Ruohu and Chen, Chen and Wang, Zhuyuan and Cui, Yiping
Journal: Nanotechnology (2019): 065701

[Sepsis impairs aggregation of nicotinic acetylcholine receptors on murine skeletal muscle cell membranes by inhibiting AKT/GSK3β phosphorylation].
Authors: Li, Tianmei and Liu, Li and Wang, Xiaobin
Journal: Nan fang yi ke da xue xue bao = Journal of Southern Medical University (2019): 1337-1343

说明书

iFluor Ultra 594 琥珀酰亚胺酯.pdf

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

iFluor Ultra 594 琥珀酰亚胺酯

	货号	71652	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	5 mg	价格	11628
	Ex (nm)	586	Em (nm)	601
	分子量	1436.72	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

荧光染料缀合抗体是许多应用中鉴定蛋白质的一种工具，包括荧光细胞成像、流式细胞术、蛋白质印迹、免疫组织化学等。使用荧光标记抗体的优势包括的灵敏度、多路复用能力和易用性。 iFluor Ultra 系列是我们广受欢迎的 iFluor 染料的升级版，并针对用于荧光成像和流式细胞术应用的标记抗体进行了优化。用 iFluor Ultra 594 制备的抗体缀合物远远优于其他现有类似染料的缀合物，如 Alexa Fluor® 594。iFluor Ultra 594 缀合物在相同条件下比用 Alexa Fluor® 594 制备的缀合物亮。此外，iFluor Ultra 594 的荧光不受 pH (4-10) 的影响。 iFluor Ultra 594 SE 染料相当稳定，并表现出与蛋白质氨基的良好反应性和选择性。 iFluor Ultra 594 的光谱特性和反应性类似于 Alexa Fluor® 594（Alexa Fluor® 是 ThermoFisher 的商标）。

点击查看光谱

产品说明书

实验方案

储备溶液配制

1. 蛋白质原液（溶液 A）
将 100 µL 反应缓冲液（例如，1 M 碳酸钠溶液或 1 M 磷酸盐缓冲液，pH ~ 9.0）与 900 µL 目标蛋白溶液（例如抗体，如果可能，蛋白质浓度 >2 mg/mL）混合，得到 1 mL 蛋白质标记原液。
注意：蛋白质溶液（溶液 A）的 pH 值应为 8.5 ± 0.5。如果蛋白质溶液的 pH 值低于 8.0，则使用 1 M 碳酸氢钠溶液或 1 M pH 9.0 磷酸盐缓冲液将 pH 值调整到 8.0-9.0 的范围内。
注意：蛋白质应溶于1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)，pH 7.2-7.4。如果蛋白质溶解在 Tris 或甘氨酸缓冲液中，则必须用 1X PBS，pH 7.2-7.4 进行透析，以去除用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如硫酸铵和醋酸铵）。
注意：如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL，缀合效率会显着降低。为获得 标记效率，建议 终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。

2. iFluor Ultra 594 SE 原液（溶液 B）
将无水 DMSO 添加到 iFluor Ultra 594 SE 小瓶中，制成 10 mM 储备溶液。通过移液或涡旋混合均匀。
注意：在开始缀合之前准备染料储备溶液（溶液 B），并及时使用。染料原液的长期储存可能会降低染料活性。溶液 B 在避光和防潮的情况下可以在冰箱中储存两周，避免冻融循环。

  

操作步骤

该标记方案是为山羊抗小鼠 IgG 与 iFluor Ultra 594 SE 的缀合而开发的。 您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。
注意：每种蛋白质需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的特性。 蛋白质的过度标记会对其缀合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。

1.进行缀合反应
1.1使用 10:1 的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）的摩尔比作为起点：将 5 μL 的染料储备溶液（溶液 B，假设染料储备溶液为 10 mM）在有效摇动下倒入蛋白质溶液（95 µL 溶液 A）小瓶中。 假设蛋白质浓度为 10 mg/mL 且蛋白质的分子量为 ~200KD，则蛋白质的浓度为 ~0.05 mM。
注意：我们建议使用 10:1 摩尔比的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）。 如果太低或太高，分别确定 染料/蛋白质比例为 5:1、15:1 和 20:1。
1.2在室温下继续旋转或摇动反应混合物 30-60 分钟。

 

2.纯化缀合物
以下方案是使用 Sephadex G-25 柱进行染料-蛋白质缀合物纯化的示例。
根据制造说明准备 Sephadex G-25 柱。
2.1将反应混合物（来自“1.进行缀合反应”）加载到 Sephadex G-25 列的顶部。
2.2样品刚好在顶部树脂表面下方运行时，立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)。
2.3向所需样品中添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱纯化。 结合含有所需染料-蛋白质偶联物的组分。
注意：要立即使用，染料-蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并分装多次使用。
注意：对于长期储存，染料-蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

 

3.数据处理

3.1表征所需的染料-蛋白质缀合物
取代度 (DOS) 是表征染料标记蛋白质的 重要因素。 较低 DOS 的蛋白质通常具有较弱的荧光强度，但较高 DOS 的蛋白质（例如 DOS > 6）也往往具有较低的荧光强度。 大多数抗体的 DOS 建议在 2 到 10 之间，具体取决于染料和蛋白质的特性。 为了有效标记，应控制取代度，使 6-8 摩尔 iFluor Ultra 594 SE 对 1 摩尔抗体。 以下步骤用于确定 iFluor Ultra 594 SE 标记蛋白质的 DOS。

3.2吸收检测
要检测染料-蛋白质缀合物的吸收光谱，建议将样品浓度保持在 1-10 µM 的范围内，具体取决于染料的消光系数。

3.3读取 280 nm 处的 OD（吸光度）和染料 大吸光度（对于 iFluor Ultra 594 染料，ƛmax = 588 nm）
对于大多数分光光度计，样品（来自色谱柱馏分）需要用去离子水稀释，以便 OD 值在 0.1 到 0.9 的范围内。 OD（吸光度）在 280 nm 是蛋白质的 大吸收，而 588 nm 是 iFluor Ultra 594 SE 的 大吸收。 要获得准确的 DOS，请确保缀合物中不含非结合染料。

3.4计算DOS
您可以通过链接使用我们的工具计算DOS

 

参考文献

A fully integrated isotachophoresis with a programmable microfluidic platform.
Authors: Shebindu, Adam and Somaweera, Himali and Estlack, Zachary and Kim, Jungtae and Kim, Jungkyu
Journal: Talanta (2021): 122039

Effect of VIRP1 Protein on Nuclear Import of Citrus Exocortis Viroid (CEVd).
Authors: Seo, Hyesu and Kim, Kyunghee and Park, Woong June
Journal: Biomolecules (2021)

Liquid Droplet Formation and Facile Cytosolic Translocation of IgG in the Presence of Attenuated Cationic Amphiphilic Lytic Peptides.
Authors: Iwata, Takahiro and Hirose, Hisaaki and Sakamoto, Kentarou and Hirai, Yusuke and Arafiles, Jan Vincent V and Akishiba, Misao and Imanishi, Miki and Futaki, Shiroh
Journal: Angewandte Chemie (International ed. in English) (2021)

MicroRNA-126 inhibits pathological retinal neovascularization via suppressing vascular endothelial growth factor expression in a rat model of retinopathy of prematurity.
Authors: Fan, Yuan-Yao and Liu, Chi-Hsien and Wu, An-Lun and Chen, Hung-Chi and Hsueh, Yi-Jen and Chen, Kuan-Jen and Lai, Chi-Chun and Huang, Chung-Ying and Wu, Wei-Chi
Journal: European journal of pharmacology (2021): 174035

Retinal ganglion cells projecting to superior colliculus and pulvinar in marmoset.
Authors: Grünert, Ulrike and Lee, Sammy C S and Kwan, William C and Mundinano, Inaki-Carril and Bourne, James A and Martin, Paul R
Journal: Brain structure & function (2021)

Fluorescently-labeled fremanezumab is distributed to sensory and autonomic ganglia and the dura but not to the brain of rats with uncompromised blood brain barrier.
Authors: Noseda, Rodrigo and Schain, Aaron J and Melo-Carrillo, Agustin and Tien, Jason and Stratton, Jennifer and Mai, Fanny and Strassman, Andrew M and Burstein, Rami
Journal: Cephalalgia : an international journal of headache (2020): 229-240

Modeling iontophoretic drug delivery in a microfluidic device.
Authors: Moarefian, Maryam and Davalos, Rafael V and Tafti, Danesh K and Achenie, Luke E and Jones, Caroline N
Journal: Lab on a chip (2020): 3310-3321

Cell-based immunofluorescence assay for screening the neurogenesis potential of new drugs in adult hippocampal neural progenitor cells.
Authors: Zhang, Kun and Li, Bin and Li, Peifang and Yang, Xiaoli and Cui, Huixian and Liu, Xiaoyun
Journal: Acta neurobiologiae experimentalis (2019): 302-308

Super blinking and biocompatible nanoprobes based on dye doped BSA nanoparticles for super resolution imaging.
Authors: Zong, Shenfei and Pan, Fengmei and Zhang, Ruohu and Chen, Chen and Wang, Zhuyuan and Cui, Yiping
Journal: Nanotechnology (2019): 065701

[Sepsis impairs aggregation of nicotinic acetylcholine receptors on murine skeletal muscle cell membranes by inhibiting AKT/GSK3β phosphorylation].
Authors: Li, Tianmei and Liu, Li and Wang, Xiaobin
Journal: Nan fang yi ke da xue xue bao = Journal of Southern Medical University (2019): 1337-1343

说明书

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

iFluor Ultra 647 琥珀酰亚胺酯

	货号	71670	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	1 mg	价格	3612
	Ex (nm)	655	Em (nm)	670
	分子量	2634.28	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

荧光染料缀合抗体是许多应用中鉴定蛋白质的一种工具，包括荧光细胞成像、流式细胞术、蛋白质印迹、免疫组织化学等。使用荧光标记抗体的优势包括灵敏度、多路复用能力和易用性。 iFluor Ultra 系列是我们广受欢迎的 iFluor 染料的升级版，并针对用于荧光成像和流式细胞术应用的标记抗体进行了优化。用 iFluor Ultra 647 制备的抗体缀合物远远优于其他现有类似染料的缀合物，如 Alexa Fluor® 647。iFluor Ultra 647 缀合物在相同条件下比用 Alexa Fluor® 647 制备的缀合物亮。此外，iFluor Ultra 647 的荧光不受 pH (4-10) 的影响。 iFluor Ultra 647 SE 染料相当稳定，并表现出与蛋白质氨基的良好反应性和选择性。 iFluor Ultra 647 的光谱特性和反应性类似于 Alexa Fluor® 647（Alexa Fluor® 是 ThermoFisher 的商标）。

点击查看光谱

产品说明书

实验方案

储备溶液配制

1. 蛋白质原液（溶液 A）
将 100 µL 反应缓冲液（例如，1 M 碳酸钠溶液或 1 M 磷酸盐缓冲液，pH ~ 9.0）与 900 µL 目标蛋白溶液（例如抗体，如果可能，蛋白质浓度 >2 mg/mL）混合，得到 1 mL 蛋白质标记原液。
注意：蛋白质溶液（溶液 A）的 pH 值应为 8.5 ± 0.5。如果蛋白质溶液的 pH 值低于 8.0，则使用 1 M 碳酸氢钠溶液或 1 M pH 9.0 磷酸盐缓冲液将 pH 值调整到 8.0-9.0 的范围内。
注意：蛋白质应溶于1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)，pH 7.2-7.4。如果蛋白质溶解在 Tris 或甘氨酸缓冲液中，则必须用 1X PBS，pH 7.2-7.4 进行透析，以去除用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如硫酸铵和醋酸铵）。
注意：如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL，缀合效率会显着降低。为获得 标记效率，建议 蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。

2. iFluor Ultra 647 SE 原液（溶液 B）
将无水 DMSO 添加到 iFluor Ultra 647 SE 小瓶中，制成 10 mM 储备溶液。通过移液或涡旋混合均匀。
注意：在开始缀合之前准备染料储备溶液（溶液 B），并及时使用。染料原液的长期储存可能会降低染料活性。溶液 B 在避光和防潮的情况下可以在冰箱中储存两周，避免冻融循环。

  

操作步骤

该标记方案是为山羊抗小鼠 IgG 与 iFluor Ultra 647 SE 的缀合而开发的。 您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。
注意：每种蛋白质需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的特性。 蛋白质的过度标记会对其缀合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。

1.进行缀合反应
1.1使用 10:1 的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）的摩尔比作为起点：将 5 μL 的染料储备溶液（溶液 B，假设染料储备溶液为 10 mM）在有效摇动下倒入蛋白质溶液（95 µL 溶液 A）小瓶中。 假设蛋白质浓度为 10 mg/mL 且蛋白质的分子量为 ~200KD，则蛋白质的浓度为 ~0.05 mM。
注意：我们建议使用 10:1 摩尔比的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）。 如果太低或太高，分别确定 染料/蛋白质比例为 5:1、15:1 和 20:1。
1.2在室温下继续旋转或摇动反应混合物 30-60 分钟。

 

2.纯化缀合物
以下方案是使用 Sephadex G-25 柱进行染料-蛋白质缀合物纯化的示例。
根据制造说明准备 Sephadex G-25 柱。
2.1将反应混合物（来自“1.进行缀合反应”）加载到 Sephadex G-25 列的顶部。
2.2样品刚好在顶部树脂表面下方运行时，立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)。
2.3向所需样品中添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱纯化。 结合含有所需染料-蛋白质偶联物的组分。
注意：要立即使用，染料-蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并分装多次使用。
注意：对于长期储存，染料-蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

 

3.数据处理

3.1表征所需的染料-蛋白质缀合物
取代度 (DOS) 是表征染料标记蛋白质的 重要因素。 较低 DOS 的蛋白质通常具有较弱的荧光强度，但较高 DOS 的蛋白质（例如 DOS > 6）也往往具有较低的荧光强度。 大多数抗体的 DOS 建议在 2 到 10 之间，具体取决于染料和蛋白质的特性。 为了有效标记，应控制取代度，使 6-8 摩尔 iFluor Ultra 647 SE 对 1 摩尔抗体。 以下步骤用于确定 iFluor Ultra 647 SE 标记蛋白质的 DOS。

3.2吸收检测
要检测染料-蛋白质缀合物的吸收光谱，建议将样品浓度保持在 1-10 µM 的范围内，具体取决于染料的消光系数。

3.3读取 280 nm 处的 OD（吸光度）和染料 大吸光度（对于 iFluor Ultra 647 染料，ƛmax = 588 nm）
对于大多数分光光度计，样品（来自色谱柱馏分）需要用去离子水稀释，以便 OD 值在 0.1 到 0.9 的范围内。 OD（吸光度）在 280 nm 是蛋白质的 大吸收，而 588 nm 是 iFluor Ultra 647 SE 的 大吸收。 要获得准确的 DOS，请确保缀合物中不含非结合染料。

3.4计算DOS
您可以通过链接使用我们的工具计算DOS

 

参考文献

A fully integrated isotachophoresis with a programmable microfluidic platform.
Authors: Shebindu, Adam and Somaweera, Himali and Estlack, Zachary and Kim, Jungtae and Kim, Jungkyu
Journal: Talanta (2021): 122039

Effect of VIRP1 Protein on Nuclear Import of Citrus Exocortis Viroid (CEVd).
Authors: Seo, Hyesu and Kim, Kyunghee and Park, Woong June
Journal: Biomolecules (2021)

Liquid Droplet Formation and Facile Cytosolic Translocation of IgG in the Presence of Attenuated Cationic Amphiphilic Lytic Peptides.
Authors: Iwata, Takahiro and Hirose, Hisaaki and Sakamoto, Kentarou and Hirai, Yusuke and Arafiles, Jan Vincent V and Akishiba, Misao and Imanishi, Miki and Futaki, Shiroh
Journal: Angewandte Chemie (International ed. in English) (2021)

MicroRNA-126 inhibits pathological retinal neovascularization via suppressing vascular endothelial growth factor expression in a rat model of retinopathy of prematurity.
Authors: Fan, Yuan-Yao and Liu, Chi-Hsien and Wu, An-Lun and Chen, Hung-Chi and Hsueh, Yi-Jen and Chen, Kuan-Jen and Lai, Chi-Chun and Huang, Chung-Ying and Wu, Wei-Chi
Journal: European journal of pharmacology (2021): 174035

Retinal ganglion cells projecting to superior colliculus and pulvinar in marmoset.
Authors: Grünert, Ulrike and Lee, Sammy C S and Kwan, William C and Mundinano, Inaki-Carril and Bourne, James A and Martin, Paul R
Journal: Brain structure & function (2021)

Fluorescently-labeled fremanezumab is distributed to sensory and autonomic ganglia and the dura but not to the brain of rats with uncompromised blood brain barrier.
Authors: Noseda, Rodrigo and Schain, Aaron J and Melo-Carrillo, Agustin and Tien, Jason and Stratton, Jennifer and Mai, Fanny and Strassman, Andrew M and Burstein, Rami
Journal: Cephalalgia : an international journal of headache (2020): 229-240

Modeling iontophoretic drug delivery in a microfluidic device.
Authors: Moarefian, Maryam and Davalos, Rafael V and Tafti, Danesh K and Achenie, Luke E and Jones, Caroline N
Journal: Lab on a chip (2020): 3310-3321

Cell-based immunofluorescence assay for screening the neurogenesis potential of new drugs in adult hippocampal neural progenitor cells.
Authors: Zhang, Kun and Li, Bin and Li, Peifang and Yang, Xiaoli and Cui, Huixian and Liu, Xiaoyun
Journal: Acta neurobiologiae experimentalis (2019): 302-308

Super blinking and biocompatible nanoprobes based on dye doped BSA nanoparticles for super resolution imaging.
Authors: Zong, Shenfei and Pan, Fengmei and Zhang, Ruohu and Chen, Chen and Wang, Zhuyuan and Cui, Yiping
Journal: Nanotechnology (2019): 065701

[Sepsis impairs aggregation of nicotinic acetylcholine receptors on murine skeletal muscle cell membranes by inhibiting AKT/GSK3β phosphorylation].
Authors: Li, Tianmei and Liu, Li and Wang, Xiaobin
Journal: Nan fang yi ke da xue xue bao = Journal of Southern Medical University (2019): 1337-1343

说明书

iFluor Ultra 647 琥珀酰亚胺酯.pdf

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

iFluor Ultra 647 琥珀酰亚胺酯

	货号	71671	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 ug	价格	1164
	Ex (nm)	655	Em (nm)	670
	分子量	2634.28	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

荧光染料缀合抗体是许多应用中鉴定蛋白质的一种工具，包括荧光细胞成像、流式细胞术、蛋白质印迹、免疫组织化学等。使用荧光标记抗体的优势包括的灵敏度、多路复用能力和易用性。 iFluor Ultra 系列是我们广受欢迎的 iFluor 染料的升级版，并针对用于荧光成像和流式细胞术应用的标记抗体进行了优化。用 iFluor Ultra 647 制备的抗体缀合物远远优于其他现有类似染料的缀合物，如 Alexa Fluor® 647。iFluor Ultra 647 缀合物在相同条件下比用 Alexa Fluor® 647 制备的缀合物亮。此外，iFluor Ultra 647 的荧光不受 pH (4-10) 的影响。 iFluor Ultra 647 SE 染料相当稳定，并表现出与蛋白质氨基的良好反应性和选择性。 iFluor Ultra 647 的光谱特性和反应性类似于 Alexa Fluor® 647（Alexa Fluor® 是 ThermoFisher 的商标）。

点击查看光谱

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实验方案

储备溶液配制

1. 蛋白质原液（溶液 A）
将 100 µL 反应缓冲液（例如，1 M 碳酸钠溶液或 1 M 磷酸盐缓冲液，pH ~ 9.0）与 900 µL 目标蛋白溶液（例如抗体，如果可能，蛋白质浓度 >2 mg/mL）混合，得到 1 mL 蛋白质标记原液。
注意：蛋白质溶液（溶液 A）的 pH 值应为 8.5 ± 0.5。如果蛋白质溶液的 pH 值低于 8.0，则使用 1 M 碳酸氢钠溶液或 1 M pH 9.0 磷酸盐缓冲液将 pH 值调整到 8.0-9.0 的范围内。
注意：蛋白质应溶于1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)，pH 7.2-7.4。如果蛋白质溶解在 Tris 或甘氨酸缓冲液中，则必须用 1X PBS，pH 7.2-7.4 进行透析，以去除用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如硫酸铵和醋酸铵）。
注意：如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL，缀合效率会显着降低。为获得 佳标记效率，建议 终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。

2. iFluor Ultra 647 SE 原液（溶液 B）
将无水 DMSO 添加到 iFluor Ultra 647 SE 小瓶中，制成 10 mM 储备溶液。通过移液或涡旋混合均匀。
注意：在开始缀合之前准备染料储备溶液（溶液 B），并及时使用。染料原液的长期储存可能会降低染料活性。溶液 B 在避光和防潮的情况下可以在冰箱中储存两周，避免冻融循环。

  

操作步骤

该标记方案是为山羊抗小鼠 IgG 与 iFluor Ultra 647 SE 的缀合而开发的。 您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。
注意：每种蛋白质需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的特性。 蛋白质的过度标记会对其缀合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。

1.进行缀合反应
1.1使用 10:1 的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）的摩尔比作为起点：将 5 μL 的染料储备溶液（溶液 B，假设染料储备溶液为 10 mM）在有效摇动下倒入蛋白质溶液（95 µL 溶液 A）小瓶中。 假设蛋白质浓度为 10 mg/mL 且蛋白质的分子量为 ~200KD，则蛋白质的浓度为 ~0.05 mM。
注意：我们建议使用 10:1 摩尔比的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）。 如果太低或太高，分别确定 佳染料/蛋白质比例为 5:1、15:1 和 20:1。
1.2在室温下继续旋转或摇动反应混合物 30-60 分钟。

 

2.纯化缀合物
以下方案是使用 Sephadex G-25 柱进行染料-蛋白质缀合物纯化的示例。
根据制造说明准备 Sephadex G-25 柱。
2.1将反应混合物（来自“1.进行缀合反应”）加载到 Sephadex G-25 列的顶部。
2.2样品刚好在顶部树脂表面下方运行时，立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)。
2.3向所需样品中添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱纯化。 结合含有所需染料-蛋白质偶联物的组分。
注意：要立即使用，染料-蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并分装多次使用。
注意：对于长期储存，染料-蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

 

3.数据处理

3.1表征所需的染料-蛋白质缀合物
取代度 (DOS) 是表征染料标记蛋白质的 重要因素。 较低 DOS 的蛋白质通常具有较弱的荧光强度，但较高 DOS 的蛋白质（例如 DOS > 6）也往往具有较低的荧光强度。 大多数抗体的 DOS 建议在 2 到 10 之间，具体取决于染料和蛋白质的特性。 为了有效标记，应控制取代度，使 6-8 摩尔 iFluor Ultra 647 SE 对 1 摩尔抗体。 以下步骤用于确定 iFluor Ultra 647 SE 标记蛋白质的 DOS。

3.2吸收检测
要检测染料-蛋白质缀合物的吸收光谱，建议将样品浓度保持在 1-10 µM 的范围内，具体取决于染料的消光系数。

3.3读取 280 nm 处的 OD（吸光度）和染料 大吸光度（对于 iFluor Ultra 647 染料，ƛmax = 588 nm）
对于大多数分光光度计，样品（来自色谱柱馏分）需要用去离子水稀释，以便 OD 值在 0.1 到 0.9 的范围内。 OD（吸光度）在 280 nm 是蛋白质的 大吸收，而 588 nm 是 iFluor Ultra 647 SE 的 大吸收。 要获得准确的 DOS，请确保缀合物中不含非结合染料。

3.4计算DOS
您可以通过链接使用我们的工具计算DOS

 

参考文献

A fully integrated isotachophoresis with a programmable microfluidic platform.
Authors: Shebindu, Adam and Somaweera, Himali and Estlack, Zachary and Kim, Jungtae and Kim, Jungkyu
Journal: Talanta (2021): 122039

Effect of VIRP1 Protein on Nuclear Import of Citrus Exocortis Viroid (CEVd).
Authors: Seo, Hyesu and Kim, Kyunghee and Park, Woong June
Journal: Biomolecules (2021)

Liquid Droplet Formation and Facile Cytosolic Translocation of IgG in the Presence of Attenuated Cationic Amphiphilic Lytic Peptides.
Authors: Iwata, Takahiro and Hirose, Hisaaki and Sakamoto, Kentarou and Hirai, Yusuke and Arafiles, Jan Vincent V and Akishiba, Misao and Imanishi, Miki and Futaki, Shiroh
Journal: Angewandte Chemie (International ed. in English) (2021)

MicroRNA-126 inhibits pathological retinal neovascularization via suppressing vascular endothelial growth factor expression in a rat model of retinopathy of prematurity.
Authors: Fan, Yuan-Yao and Liu, Chi-Hsien and Wu, An-Lun and Chen, Hung-Chi and Hsueh, Yi-Jen and Chen, Kuan-Jen and Lai, Chi-Chun and Huang, Chung-Ying and Wu, Wei-Chi
Journal: European journal of pharmacology (2021): 174035

Retinal ganglion cells projecting to superior colliculus and pulvinar in marmoset.
Authors: Grünert, Ulrike and Lee, Sammy C S and Kwan, William C and Mundinano, Inaki-Carril and Bourne, James A and Martin, Paul R
Journal: Brain structure & function (2021)

Fluorescently-labeled fremanezumab is distributed to sensory and autonomic ganglia and the dura but not to the brain of rats with uncompromised blood brain barrier.
Authors: Noseda, Rodrigo and Schain, Aaron J and Melo-Carrillo, Agustin and Tien, Jason and Stratton, Jennifer and Mai, Fanny and Strassman, Andrew M and Burstein, Rami
Journal: Cephalalgia : an international journal of headache (2020): 229-240

Modeling iontophoretic drug delivery in a microfluidic device.
Authors: Moarefian, Maryam and Davalos, Rafael V and Tafti, Danesh K and Achenie, Luke E and Jones, Caroline N
Journal: Lab on a chip (2020): 3310-3321

Cell-based immunofluorescence assay for screening the neurogenesis potential of new drugs in adult hippocampal neural progenitor cells.
Authors: Zhang, Kun and Li, Bin and Li, Peifang and Yang, Xiaoli and Cui, Huixian and Liu, Xiaoyun
Journal: Acta neurobiologiae experimentalis (2019): 302-308

Super blinking and biocompatible nanoprobes based on dye doped BSA nanoparticles for super resolution imaging.
Authors: Zong, Shenfei and Pan, Fengmei and Zhang, Ruohu and Chen, Chen and Wang, Zhuyuan and Cui, Yiping
Journal: Nanotechnology (2019): 065701

[Sepsis impairs aggregation of nicotinic acetylcholine receptors on murine skeletal muscle cell membranes by inhibiting AKT/GSK3β phosphorylation].
Authors: Li, Tianmei and Liu, Li and Wang, Xiaobin
Journal: Nan fang yi ke da xue xue bao = Journal of Southern Medical University (2019): 1337-1343

说明书

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