产品基本信息

货号：1059

产品名称：iFluor 546 马来酰亚胺

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：1082.10

外观：固体

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：541

发射波长(nm)：557

产品介绍

AAT Bioquest 的 iFluor 染料针对标记蛋白质，尤其是抗体进行了优化。 这些染料明亮、耐光，对蛋白质的淬灭作用小。 iFluor 546 经过优化，可被 546 nm 激光或 LED 光源很好地激发，从而为配备 546 nm 546 nm 激光或 LED 光源的荧光仪器提供新的生物学应用。 iFluor 546 染料可能是可用的亮的荧光团，可被 546 nm 激光或 LED 光源充分激发。 iFluor 546 马来酰亚胺稳定，与硫醇基团显示出良好的反应性和选择性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的iFluor 546 马来酰亚胺。 

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参考文献

Group V Secretory Phospholipase A2 Regulates Endocytosis of Acetylated LDL by Transcriptional Activation of PGK1 in RAW264.7 Macrophage Cell Line.
Authors: Fujioka, Daisuke and Watanabe, Yosuke and Nakamura, Takamitsu and Yokoyama, Takashi and Miyazawa, Keiji and Murakami, Makoto and Kugiyama, Kiyotaka
Journal: Journal of atherosclerosis and thrombosis (2021)

Long-Range Single-Molecule Förster Resonance Energy Transfer between Alexa Dyes in Zero-Mode Waveguides.
Authors: Baibakov, Mikhail and Patra, Satyajit and Claude, Jean-Benoît and Wenger, Jérôme
Journal: ACS omega (2020): 6947-6955

Quantitative Assessment of Tendon Hierarchical Structure by Combined Second Harmonic Generation and Immunofluorescence Microscopy.
Authors: Durgam, Sushmitha and Singh, Benjamin and Cole, Sara L and Brokken, Matthew T and Stewart, Matthew
Journal: Tissue engineering. Part C, Methods (2020): 253-262

Surface passivation of zero-mode waveguide nanostructures: benchmarking protocols and fluorescent labels.
Authors: Patra, Satyajit and Baibakov, Mikhail and Claude, Jean-Benoît and Wenger, Jérôme
Journal: Scientific reports (2020): 5235

Curare alkaloids from Matis Dart Poison: Comparison with d-tubocurarine in interactions with nicotinic, 5-HT3 serotonin and GABAA receptors.
Authors: Spirova, Ekaterina N and Ivanov, Igor A and Kasheverov, Igor E and Kudryavtsev, Denis S and Shelukhina, Irina V and Garifulina, Alexandra I and Son, Lina V and Lummis, Sarah C R and Malca-Garcia, Gonzalo R and Bussmann, Rainer W and Hennig, Lothar and Giannis, Athanassios and Tsetlin, Victor I
Journal: PloS one (2019): e0210182

Time-Gated FRET and DNA-Based Photonic Molecular Logic Gates: AND, OR, NAND, and NOR.
Authors: Massey, Melissa and Medintz, Igor L and Ancona, Mario G and Algar, W Russ
Journal: ACS sensors (2017): 1205-1214

Photoinduced apoptosis using a peptide carrying a photosensitizer.
Authors: Watanabe, Kazunori and Fujiwara, Hayato and Kitamatsu, Mizuki and Ohtsuki, Takashi
Journal: Bioorganic & medicinal chemistry letters (2016): 3115-3118

Alexa fluor-labeled fluorescent cellulose nanocrystals for bioimaging solid cellulose in spatially structured microenvironments.
Authors: Grate, Jay W and Mo, Kai-For and Shin, Yongsoon and Vasdekis, Andreas and Warner, Marvin G and Kelly, Ryan T and Orr, Galya and Hu, Dehong and Dehoff, Karl J and Brockman, Fred J and Wilkins, Michael J
Journal: Bioconjugate chemistry (2015): 593-601

Photosensitizer and polycationic peptide-labeled streptavidin as a nano-carrier for light-controlled protein transduction.
Authors: Minamihata, Kosuke and Maeda, Yasukazu and Yamaguchi, Satoshi and Ishihara, Wataru and Ishiwatari, Akira and Takamori, Satoshi and Yamahira, Shinya and Nagamune, Teruyuki
Journal: Journal of bioscience and bioengineering (2015): 630-6

Quantitative Noninvasive Angiography of the Fovea Centralis Using Speckle Variance Optical Coherence Tomography.
Authors: Mammo, Zaid and Balaratnasingam, Chandrakumar and Yu, Paula and Xu, Jing and Heisler, Morgan and Mackenzie, Paul and Merkur, Andrew and Kirker, Andrew and Albiani, David and Freund, K Bailey and Sarunic, Marinko V and Yu, Dao-Yi
Journal: Investigative ophthalmology & visual science (2015): 5074-86

染色样本分析

操作步骤

1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：

将100μL反应缓冲液（如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液，pH~9.0）与900μL目标蛋白溶液（如抗体，蛋白质浓度> 2 mg / ml，如果可能）混合至100μL给予1 mL蛋白质标记原液。

注1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注2：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。

注3：不纯的抗体、稳定的牛血清蛋白（BSA）抗体或明胶不会被很好的标记。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞，以获得标记结果。

注4：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，则结合效率会显着降低。为获得标记效率，建议极终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

2.准备染料储备溶液（溶液B）：

将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意：在开始缀合前准备染料储备溶液（溶液B）。 及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周，避光保存。 避免冻融循环。

3.确定染料/蛋白质比例（可选）：

注意：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能不利地影响其结合亲和力，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定染料/蛋白质比率。通常，对于大多数染料 – 蛋白质缀合物，推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5μl染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到样品瓶中。蛋白质溶液（95μl溶液A）有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意：蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10％。

3.2运行缀合反应（参见下面的步骤4）。

3.3重复＃3.2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1;分别为15：1和20：1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比（DOS）（见说明书）。

3.6运行上述4种结合物的功能测试，确定的染料/蛋白质比例，以扩大标记反应。

4.运行结合反应：

4.1有效加入适量的染料储备溶液（溶液B）到蛋白质溶液（溶液A）的小瓶中晃动。

注意：溶液B /溶液的摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3，我们建议使用10：1溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 – 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物（直接从步骤4）加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS（pH 7.2-7.4）。

5.4向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色谱柱纯化。 合并含有所需染料 – 蛋白质缀合物的级分。

注1：立即使用时，染料 – 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并等分多次使用。

注2：对于长期储存，染料 – 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥

参考文献

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