Amplite 硫醇快速定量试剂盒(荧光法)绿色荧光

	货号	5528	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	2604
	Ex (nm)	510	Em (nm)	524
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 硫醇快速定量试剂盒(荧光法)绿色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于硫醇定量的试剂盒，具有马来酰亚胺基团的各种交联剂广泛用于将蛋白质与蛋白质或蛋白质交联至其他生物分子。马来酰亚胺交联技术的关键点是与单一蛋白质或抗体连接的马来酰亚胺的定量。马来酰亚胺可以在302nm下通过分光光度法直接测定。然而，620M-1cm-1的小消光系数使得该测定不敏感，并且该测定由于在相同波长下的蛋白质吸光度而进一步复杂化。 AAT Bioquest的Amplite 快速比色马来酰亚胺定量试剂盒使用我们专有的马来酰亚胺传感器Maleimide Blue ，在~780nm处具有大吸光度，可快速准确地量化马来酰亚胺。该测定的原理是马来酰亚胺蓝 与马来酰亚胺连接的样品反应，并且所得产物通过单个旋转柱以除去过量的传感器。测量纯化产物的吸收光谱，并且可以从780nm和280nm（对于蛋白质）或260nm（对于寡核苷酸和核酸）的吸光度比计算马来酰亚胺与蛋白质的比率。这种Amplite 快速马来酰亚胺定量试剂盒可在传统的比色皿，NanoDrop 分光光度计或方便的96孔吸光板读数器中进行，带有UV透明板。该试剂盒已广泛用于从蛋白质，寡核苷酸和核酸样品中快速定量马来酰亚胺基团。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 硫醇快速定量试剂盒(荧光法)绿色荧光。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备GSH工作溶液（50μL）
2.添加GSH标准品或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10至60分钟
4.监测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光增加（截止= 515 nm）

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 GSH标准溶液（1 mM）：
将200μLddH2 O加入到GSH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol /μL）GSH标准溶液。

1.2 Thiolite Green原液（100X）：
将100μLDMSO（组分D）加入到Thiolite Green（组分A）的小瓶中以制备100X Thiolite Green原液。

2.标准溶液配制
将30μL的1mM（1nmol /μL）GSH标准溶液加入到970μL的测定缓冲液（组分B）中以产生30μM（30pmol /μL）GSH标准溶液。 取30μM（30 pmol /μL）GSH标准溶液，进行1：3连续稀释，得到用分析缓冲液（组分B）连续稀释的GSH标准品（SD7-SD1）。 注意：稀释的GSH标准溶液不稳定。 在4小时内使用。

3.工作溶液配制

将50μL100XThiolite Green原液加入5 mL分析缓冲液（组分B）中，充分混合，制成GSH工作溶液。 注意：这种GSH工作溶液足以容纳一个96孔板。 在室温下不稳定，应在2小时内及时使用。 避免暴露在光线下。 注意：或者，可以通过按比例添加含有分析缓冲液（组分B）的100X Thiolite Green原液来制备GSH工作溶液。

操作步骤

表1.实心黑色96孔微孔板中GSH标准品和测试样品的布局。 SD = GSH标准品（SD1  –  SD7,0.014至10μM）; BL =空白对照; TS =测试样品

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备GSH标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。 注意：根据需要处理细胞或组织样本。

2.向GSH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLGSH工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLGSH工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应10至60分钟，避光。

4.用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下监测荧光增加。

参考文献

Activation of transcription factors in human bronchial epithelial cells exposed to aqueous extracts of mainstream cigarette smoke in vitro
Authors: Takashi Sekine, Tadashi Hirata, Toshiki Mine, Yasuo Fukano
Journal: Toxicology mechanisms and methods (2016): 22–31

Amplite 比色法α-酮戊二酸定量试剂盒

	货号	10085	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	5244
	Ex (nm)	570	Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 比色法α-酮戊二酸定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。α-酮戊二酸（α-酮戊二酸）是克雷布斯循环中的关键分子，其决定了生物体的柠檬酸循环的总体速率。作为谷氨酸和谷氨酰胺的前体，α-酮戊二酸也是胃肠道细胞的中枢代谢燃料。它可以降低蛋白质分解代谢并增加蛋白质合成，从而增强骨骼肌中的骨组织形成，并可用于临床应用。 α-酮戊二酸用于肾脏疾病;肠道和胃部疾病，包括细菌感染;肝脏问题;白内障;和反复发酵的酵母菌感染。它还用于改善接受血液透析治疗的肾病患者处理蛋白质的方式。 AAT Bioquest的Amplite 比色α-酮戊二酸定量试剂盒提供灵敏的比色分析，用于定量生物样品中的α-酮戊二酸。它利用酶偶联反应释放过氧化氢，可通过Amplite Red在吸光度酶标仪中在570 nm处检测到。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 比色法α-酮戊二酸定量试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备测试样品和连续稀释的α-酮戊二酸标准品（50μL）
2.加入等体积的α-酮戊二酸工作液（50μL）
3.在37°C孵育60-90分钟
4.监测570nm处的吸光度强度

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 红色储备液（200X）：
将50μLDMSO（组分E）加入到Amplite TM Red（组分A）的小瓶中以制备200X储备溶液。

2.标准溶液

2.1α-酮戊二酸标准
将10μL10mMα-酮戊二酸标准品（组分D）加入990μLPBS中，得到100μMα-酮戊二酸标准溶液（AKG7）。 然后进行1：2连续稀释以获得连续稀释的α-酮戊二酸标准品（AKG6-AKG1）。

3.工作溶液

3.1将5 mL测定缓冲液（组分C）加入一个酶混合物1瓶（组分B1）中并充分混合。

3.2将100μLDdH2O加入一个酶混合物2小瓶（组分B2）中并充分混合。

3.3将整个小瓶（100μL）的酶混合物2和25μL的200X Amplite Red储备溶液转移到小瓶混合物1的小瓶中并充分混合以制备α-酮戊二酸的工作溶液。 注意：5mLα-酮戊二酸工作溶液足以容纳一个96孔板。 它不稳定，请及时使用。

样品分析

表1.在96孔透明底微孔板中的α-酮戊二酸标准品和测试样品的布局。 AKG =α-酮戊二酸标准品（AKG1-AKG7,1.563至100μM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备α-酮戊二酸标准品（AKG），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向α-酮戊二酸标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLα-酮戊二酸工作溶液，使总α-酮戊二酸测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLα-酮戊二酸工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.将反应混合物在37℃孵育60-90分钟。

4.用吸光度板读数器监测吸光度的增加，在OD为570nm时进行路径检查。

参考文献

Dietary alpha-ketoglutarate promotes higher protein and lower triacylglyceride levels and induces oxidative stress in larvae and young adults but not in middle-aged Drosophila melanogaster
Authors: Bayliak MM, Lylyk MP, Shmihel HV, Sorochynska OM, Semchyshyn OI, Storey JM, Storey KB, Lushchak VI.
Journal: Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol (2017): 28

Loss of Nardilysin, a Mitochondrial Co-chaperone for alpha-Ketoglutarate Dehydrogenase, Promotes mTORC1 Activation and Neurodegeneration
Authors: Yoon WH, Sandoval H, Nagarkar-Jaiswal S, Jaiswal M, Yamamoto S, Haelterman NA, Putluri N, Putluri V, Sreekumar A, Tos T, Aksoy A, Donti T, Graham BH, Ohno M, Nishi E, Hunter J, Muzny DM, Carmichael J, Shen J, Arboleda VA, Nelson SF, Wangler MF, Karaca E, Lupski JR, Bellen HJ.
Journal: Neuron (2017): 115

The facial triad in the alpha-ketoglutarate dependent oxygenase FIH: A role for sterics in linking substrate binding to O2 activation
Authors: Hangasky JA, Taabazuing CY, Martin CB, Eron SJ, Knapp MJ.
Journal: J Inorg Biochem (2017): 26

alpha-Ketoglutarate Accelerates the Initial Differentiation of Primed Human Pluripotent Stem Cells
Authors: TeSlaa T, Chaikovsky AC, Lipchina I, Escobar SL, Hochedlinger K, Huang J, Graeber TG, Braas D, Teitell MA.
Journal: Cell Metab (2016): 485

Alpha-Ketoglutarate as a Molecule with Pleiotropic Activity: Well-Known and Novel Possibilities of Therapeutic Use
Authors: Zdzisinska B, Zurek A, Kandefer-Szerszen M.
Journal: Arch Immunol Ther Exp (Warsz). (2016)

alpha-Ketoglutarate dehydrogenase complex moonlighting: ROS signalling added to the list: An Editorial highlight for ‘Reductions in the mitochondrial enzyme alpha-ketoglutarate dehydrogenase complex in neurodegenerative disease – beneficial or detrimental?’
Authors: Fernandez E, Bolanos JP.
Journal: J Neurochem (2016): 689

Alpha-ketoglutarate enhances milk protein synthesis by porcine mammary epithelial cells
Authors: Jiang Q, He L, Hou Y, Chen J, Duan Y, Deng D, Wu G, Yin Y, Yao K.
Journal: Amino Acids (2016): 2179

alpha-ketoglutarate is associated with delayed wound healing in diabetes
Authors: Tan Q, Wang W, Yang C, Zhang J, Sun K, Luo HC, Mai LF, Lao Y, Yan L, Ren M.
Journal: Clin Endocrinol (Oxf) (2016): 54

Alpha-ketoglutarate promotes skeletal muscle hypertrophy and protein synthesis through Akt/mTOR signaling pathways
Authors: Cai X, Zhu C, Xu Y, Jing Y, Yuan Y, Wang L, Wang S, Zhu X, Gao P, Zhang Y, Jiang Q, Shu G.
Journal: Sci Rep (2016): 26802

Alpha-ketoglutarate reduces ethanol toxicity in Drosophila melanogaster by enhancing alcohol dehydrogenase activity and antioxidant capacity
Authors: Bayliak MM, Shmihel HV, Lylyk MP, Storey KB, Lushchak VI.
Journal: Alcohol (2016): 23

相关产品

Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒

	货号	12518	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	1 plate	价格	1944
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于荧光素酶报告基因检测的试剂盒。β-半乳糖苷酶，β-葡萄糖醛酸酶和荧光素酶是常见的报告基因。最好的多功能常见报告基因是来自于北美的萤火虫Photinus pyralis的荧光素酶。此酶蛋白的活性不需要进行蛋白质翻译后修饰获得。它在活细胞中高浓度积累不会造成细胞毒性，可以在原核和真核细胞中使用。在ATP、镁离子和氧存在的条件下，萤火虫荧光素酶催化荧光素氧化形成生物荧光。Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒利用与荧光强度相关的公式来定量检测活细胞和细胞抽提物中的荧光素酶。在荧光素酶的催化下，我们的试剂/试剂盒会产生具有强烈荧光的荧光产物。本试剂盒提供所有的必需组分，并且经过优化处理，我们还提供可以用于HTS（高通量筛选）实验方案。本试剂盒具有非常好的灵敏度，可以用于对灵敏度有要求的分析。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒。 

金畔问号：荧光素酶到底该如何检测？

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备细胞（样品）（96孔板是100 µL /孔，384孔板是25 µL /孔）
2.添加等量的萤光素酶工作溶液
3.在室温下孵育10-20分钟
4.检测560 nm处的荧光强度

溶液制备 

1.工作溶液配制

将全部反应缓冲液（组分B）转移到荧光素酶（组分A）的瓶中，并充分混合以制成荧光素酶工作溶液。

点击查看细胞制备指南

样品操作及分析

1.进行荧光素酶检测：

1.1通过在所需化合物缓冲液中加入10 µL 10X测试化合物（96孔板）或5 µL 5X测试化合物（384孔板）来用检测化合物处理细胞（或样品）。 对于空白孔（没有细胞的培养基），添加相应量的化合物缓冲液。

1.2将细胞板在5％CO₂培养箱中于37°C孵育一段时间（通常为4小时至过夜）。

1.3每孔荧光素酶工作溶液添加100 µL（96孔板）或25 µL（384孔板）。

1.4避光在室温下孵育平板10-20分钟。

1.5用酶标仪检测荧光强度。

2.建立标准的萤光素酶校准曲线：注意：如果需要计算样品中萤光素酶的绝对量，则应与上述测定法一起生成萤光素酶标准曲线。

2.1使用不含萤光素酶的样品（作为对照）来检测背景发光，在含0.1％BSA的PBS缓冲液中进行一系列萤光素酶稀释液。 注意：通常萤光素酶的浓度从1 pg / mL到1 ng / mL是合适的。

2.2将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的稀释的荧光素酶溶液添加到一个空板中。

2.3加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的荧光素酶工作溶液。

2.4在避光的条件下，将反应混合物在室温下孵育10-20分钟。

2.5用标准酶标仪记录荧光强度。

2.6生成荧光素酶标准曲线。

参考文献

LncRNA TUBA4B functions as a competitive endogenous RNA to inhibit gastric cancer progression by elevating PTEN via sponging miR-214 and miR-216a/b
Authors: Jianbo Guo, Yan Li, He Duan, Lu Yuan
Journal: Cancer Cell International (2019): 156

Identification of compounds that modulate retinol signaling using a cell-based qHTS assay
Authors: Yanling Chen, Srilatha Sakamuru, Ruili Huang, David H Reese, Menghang Xia
Journal: Toxicology in Vitro (2016): 287–296

Microwave ablation-assisted liver gene transfection in rats
Authors: Ruoyu Jiang, Lingkai Meng, Longhao Sun, Xianghui He, Xiaoyu Liang, Jie Zhang, Zhixiang Zhang
Journal: International Journal of Hyperthermia (2016): 666–672

Activation of relaxin family receptor 1 from different mammalian species by relaxin peptide and small-molecule agonist ML290
Authors: Zaohua Huang, Courtney Myhr, Ross AD Bathgate, Brian A Ho, Amaya Bueno, Xin Hu, Jingbo Xiao, Noel Southall, Elena Barnaeva, Irina U Agoulnik
Journal: Frontiers in endocrinology (2015)

Neuroprotective effect of schizandrin A on oxygen and glucose deprivation/reperfusion-induced cell injury in primary culture of rat cortical neurons
Authors: Cai-Ping Wang, Gui-Cai Li, Yun-Wei Shi, Xiao-Chuan Zhang, Jian-Long Li, Zhi-Wei Wang, Fei Ding, Xin-Miao Liang
Journal: Journal of physiology and biochemistry (2014): 735–747

Discovery of ML367, inhibitor of ATAD5 stabilization
Authors: Jason M Rohde, Ganesha Rai, Yong Jun Choi, Srilatha Sakamuru, Jennifer T Fox, Ruili Huang, Menghang Xia, Kyungjae Myung, Matthew B Boxer, David J Maloney
Journal: (2013)