概述

该试剂盒应用多聚辣根过氧化物酶偶联抗鼠和抗兔IgG分子作为二抗，直接与一抗结合，从而简化了传统三步法IHC的实验步骤，同时还有很好的信号放大功能，是目前灵敏度最高的检测试剂盒。

特点

• 操作简便：无需太多准备，拿到试剂盒既能开展试验。 重现性好：实验结果重复性高。

应用

用于免疫组织化学实验，两种包装分别可用于20张和50张切片。

使用说明

1. 组织固定：在脱蜡之前，将切片60°C恒温箱中烘烤60分钟。 2. 脱蜡：将切片用二甲苯浸泡10分钟，更换二甲苯后再浸泡10分钟。 3. 水化：分别用无水乙醇浸泡5分钟；95%乙醇中浸泡5分钟；85%乙醇中浸泡5分钟；75%乙醇中浸泡5分钟。 4. 洗涤：ddH2O浸泡5分钟，清洗3次。 5. 抗原修复（煮沸法）：压力锅中加入足以淹没切片的10 mmol/ml的枸橼酸盐缓冲液（pH 6.0）（配制：将复性剂溶于相应体积 ddH2O中，混匀），加热至沸腾，切片置耐热塑料切片架上，放入锅中，盖好锅盖，扣上压力阀，继续加热，设置保压3 min，时间到后打开放气阀放气，压力归零后开锅盖将内锅取出放置室温冷却，待溶液冷却至室温后取出切片（约30 min）。 6. 洗涤：ddH2O浸泡5分钟，清洗2次，PBST浸泡5分钟，清洗2次 7. 灭活酶：每张切片滴加50 μl灭活酶试剂，室温避光处理15分钟。 8. 洗涤：PBST浸泡5分钟，清洗3次。（第一次迅速倒掉） 9. 封闭：每张切片滴加3% BSA-PBST 50 μl，湿盒中室温封闭30分钟。 10. 加一抗：弃去封闭液，每张切片滴加50 μl一抗，4℃湿盒中孵育过夜或37°C 1小时。 11. 复温：次日取出切片，室温复温40分钟 12. 洗涤：PBST浸泡5分钟，清洗3次。（第一次迅速倒掉） 13. 加酶标二抗：每张切片滴加HRP标记的二抗（抗兔）25μl，室温或37°C孵育30分钟。 14. 洗涤：PBST浸泡5分钟，清洗3次。（第一次迅速倒掉） 15. 显色（DAB法）：每张切片滴加50 μl显色液（显色液配制：42.5μl ddH2O+ 2.5μl DAB缓冲液（20×）+2.5μl DAB底物（20×）+2.5μl DAB色原（20×），避光现配现用，按需要量配制），湿盒中显色5分钟。 16. 终止显色：用蒸馏水终止显色反应。 17. 复染：每张切片滴加50 μl苏木素体细胞快速染色液，染色5分钟 ，用蒸馏水冲洗干净。 18. 脱色反蓝：将切片放入1%盐酸~乙醇中脱色3~5秒后迅速取出放入蒸馏水中终止，再放入PBST中反蓝5分钟。 19. 封片：分别在75%乙醇中浸泡5分钟；85%乙醇中浸泡5分钟；95%乙醇中浸泡5分钟；无水乙醇中浸泡5分钟。用二甲苯浸泡10分钟，更换二甲苯后再浸泡10分钟。之后在切片上加中性树胶，加盖玻片。 20. 观察：显微镜。

组份

复性剂;3% H2O2;HRP标记的二抗（抗兔）;DAB显色试剂盒（20X）;a.DAB缓冲液;b.DAB底物;c.DAB色原;苏木素体细胞快速染色液