Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒

简要概述

钙通量分析是筛选G蛋白偶联受体（GPCR） 发现的方法。该比值钙测定试剂盒允许均匀测量由G蛋白偶联受体或钙通道激活引起的细胞内钙变化。表达通过钙传递信号的GPCR的细胞被Fura-2AM预加载，Fura-2AM可以穿过细胞膜。一旦进入细胞内，亲脂封闭基团Fura-2AM被酯酶裂解，导致带负电荷的荧光染料留在细胞内，其荧光波长在与钙结合时蓝移。当细胞受到激动剂刺激时，受体发出细胞内钙离子释放的信号，从而大大提高Fura-2在短波处的荧光强度。Fura-2的比色特性使该试剂盒成为比单波长Fluo-4更精确测定细胞钙浓度的理想工具。通过单次添加，该分析很容易在高透性环境中进行。该方法可用于96孔或384孔微孔板，且易于自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 在生长培养基中准备细胞

2. 添加Fura-2 AM染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）

3. 在室温下孵育1-2小时

4. 检测Ex / Em = 340/510 nm和380/510 nm的荧光强度

溶液配制

储备溶液配制

1. Fura-2 AM储备溶液：将200 µL DMSO加入小瓶Fura-2 AM（组分A）中，并充分混合。 注意：20 µL Fura-2 AM储备溶液足以装满一块板。 如果试管密封严密，可将未使用的Fura-2 AM储备溶液分装并在<-20℃下保存超过一个月。 避光并避免重复的冻融循环。

2.分析缓冲液（1X）：a）对于＃36320（10板试剂盒），通过将9mL HHBS（组分C）添加到10XPluronic®F127 Plus（1 mL，组分B）中来制成1X分析缓冲液，并充分混合。
b）对于＃36321（100个板试剂盒），通过向10XPluronic®F127 Plus（10 mL，组分B）中加入90 mL HHBS（未包括）制成1X分析缓冲液。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的1X分析缓冲液。 避光并避免重复的冻融循环。

工作溶液配制

Fura-2 AM染料加载溶液：将20 µL Fura-2 AM储备溶液添加到10 mL 1X分析缓冲液中，并充分混合。 注意：该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。

实验步骤

1.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Fura-2 AM染料加载溶液添加到细胞板中。 注意：如果您的化合物干扰血清，则需要用HHBS缓冲液代替生长培养基。

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育1小时，然后在室温下再孵育20分钟。 注意：如果测定需要37℃，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。

3.用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。

4.通过监测Ex / Em = 340/510 nm和380/510 nm处的荧光增加来进行钙通量测定。 注意：在实验前进行信号测试非常重要。 不同的仪器具有各自的强度范围。 注意：对于在FDSS上进行的测定，请在仪器上对Fura-2钙测定使用标准滤波器。

图示

图1.用Screen Quest Fura-2 免洗钙含量测定试剂盒测量的CHO-K1细胞中的ATP剂量反应。 将CHO-K1细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 将细胞与100 µL Screen Quest Fura-2 免洗钙含量测定试剂盒在室温下孵育1小时。 通过FlexStation（分子设备）添加ATP（50 µL /孔）以达到 终指示的浓度。