鬼笔环肽-iFluor 514标记

简要概述

        鬼笔环肽-iFluor 514标记探针会选择性地结合F-肌动蛋白。以纳摩尔浓度使用，鬼笔环肽衍生物是方便的探针，用于标记，鉴定和定量甲醛固定和透化组织切片中的F-肌动蛋白，细胞培养物或无细胞实验。肌动蛋白是一种球状的，大约42kDa的蛋白质，几乎存在于所有真核细胞中。 它也是高度保守的蛋白质之一，与藻类和人类不同的物种相差不超过20％。 肌动蛋白是细胞中两种细丝的单体亚基：微丝，细胞骨架的三个主要组分之一，以及微丝，是肌细胞中收缩装置的一部分。 因此，肌动蛋白参与许多重要的细胞过程，包括肌肉收缩，细胞运动，细胞分裂和胞质分裂，囊泡和细胞器运动，细胞信号传导，以及细胞连接和细胞形状的建立和维持。

        鬼笔环肽比肌动蛋白单体更紧密地结合肌动蛋白丝，导致肌动蛋白亚基从丝状末端解离的速率常数降低，基本上通过防止丝解聚来稳定肌动蛋白丝。此外，发现鬼笔环肽抑制F-肌动蛋白的ATP水解活性。鬼笔环肽在细胞中以不同浓度起作用不同。当以低浓度引入细胞质时，鬼笔环肽将较少聚合形式的细胞质肌动蛋白以及微丝蛋白聚集成聚集的肌动蛋白聚合物的稳定“岛”，但它不会干扰应力纤维，即厚的微丝束。鬼笔环肽的性质是通过用荧光类似物标记鬼笔环肽并用它们染色肌动蛋白丝用于光学显微镜来研究F-肌动蛋白在细胞中的分布的有用工具。鬼笔环肽的荧光衍生物已经证明在定位活细胞或固定细胞中的肌动蛋白丝以及在体外可视化单个肌动蛋白丝方面非常有用。荧光鬼笔环肽衍生物已被用作高分辨率肌动蛋白研究中的重要工具。 鬼笔环肽-iFluor 514标记探针是AAT Bioquest为多色成像应用提供的一种荧光鬼笔环肽衍生物。

产品说明书

样品分析方案

概述

在微孔板孔中制备样品

从板中的样品中取出液体

添加鬼笔环肽-iFluor 514溶液（100μL/孔）

在室温下染色细胞20至90分钟

清洗细胞在显微镜下检查样品

注意：将小瓶加热至室温并在打开前短暂离心。

操作步骤

1.制备1000 X鬼笔环肽DMSO储备液：将30μLDMSO加入粉末形式的小瓶中。

2.制备1X鬼笔环肽结合物工作溶液：加入1μL1000X鬼笔环肽结合物DMSO溶液至1 mL含1％BSA的PBS。

注意1：鬼笔环肽结合物的未使用的1000X DMSO储备溶液应等分并储存在-20℃，避光。

注意2：不同的细胞类型可能染色不同。 应相应地制备鬼笔环肽结合物工作溶液的浓度。

3.染色细胞：

3.1执行甲醛固定。 在室温下将含3.0-4.0％甲醛的细胞在PBS中孵育10-30分钟。

3.2用PBS冲洗固定的细胞2-3次。

3.3可选：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定细胞（步骤2.2）3至5分钟，以增加渗透性。 用PBS冲洗细胞2-3次。

3.4将100μL/孔（96孔板）鬼笔环肽缀合物工作溶液（来自步骤1）加入固定的细胞（来自步骤2.2或2.3），并在室温下染色细胞20至90分钟。

3.5用PBS轻轻冲洗细胞2至3次以除去过量的鬼笔环肽结合物，然后在显微镜下进行，密封和成像。