mFluor Violet 500琥珀酰亚胺酯

简要概述

      mFluor Violet 500琥珀酰亚胺酯 蛋白标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的 便捷方法。AAT Bioquest的mFluor 染料专为多色流式细胞仪应用而开发。这些染料具有大的斯托克斯位移，并且可以被流式细胞仪的激光线（例如，405nm，488nm和633nm）很好地激发。 mFluor Violet 500染料的荧光激发和发射 值分别为~405 nm和~500 nm。这些光谱特性使其成为Pacific Green （ThermoFisher）和BD Horizon V500标记染料的替代品。 mFluor Violet 500 SE相当稳定，对蛋白质氨基团具有良好的反应性和选择性。 mFluor Violet 500 SE提供了一种方便的工具，，用于紫外激光激发的流式细胞仪应用。在相同条件下，mFluor Violet 500染料结合物比Pacific Green （ThermoFisher）和BD Horizon V500的相应生物结合物明显更亮，具有更强的吸收，使得mFluor Violet 500结合物更加灵敏。

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产品说明书

标准操作规程（标记50μg蛋白质）

      将所有组分加热并在打开前将样品瓶短暂离心，并在开始结合前立即准备所需的溶液。 以下SOP是标记抗HDAC IgG抗体的实例。

1.准备蛋白质溶液（溶液A）：

为了标记50g蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1mg / mL），将5L（总反应体积的10％）的反应缓冲液（组分B）与50L目标蛋白质溶液混合。

注1.如果您的蛋白质浓度不同，请相应调整蛋白质体积，使~50μg蛋白质可用于标记反应。

注2：为了标记100g蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1mg / mL），将10μL（总反应体积的10％）反应缓冲液（组分B）与100μL目标蛋白质溶液混合。

注3：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中;如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中，必须用1X PBS（pH 7.2-7.4）透析，或使用Amicon Ultra-0.5，Ultracel-10膜，10 kDa（来自Millipore的cat＃UFC501008）去除游离胺或铵盐（如硫酸铵和乙酸铵）广泛用于蛋白质沉淀。

注4：用牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的不纯抗体或抗体不能很好地标记。

注5：如果蛋白质浓度小于1 mg / mL，则结合效率显着降低。为获得标记效率，建议 终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL。

2.运行结合反应：

2.1将蛋白质溶液（溶液A）加入一瓶标记染料（组分A）中，通过反复移液几次将其混合均匀，或将小瓶涡旋几秒钟。

注意：使用标记染料的两个小瓶（组分A）通过将100μg蛋白质分成2×50μg蛋白质并使每个50μg蛋白质与一小瓶标记染料反应来标记100μg蛋白质。 将两个小瓶合并用于下一步。

2.2将缀合反应混合物在室温下保持30-60分钟。

注意：如果需要，可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。

3.停止共轭反应：

3.1添加5 L（对于50μg蛋白质）或10L（对于100μg蛋白质），其为TQ染色猝灭缓冲液（组分C）的总反应体积的10％到缀合反应混合物中（来自步骤2.2），将它们混合 好。

3.2在室温下孵育10分钟。

3.3标记的蛋白质（抗体）现在可以使用了。