Cell Meter 细胞内谷胱甘肽检测试剂盒是一种具有多种参数可监测细胞凋亡的试剂盒。该试剂盒通过测量还原型谷胱甘肽（GSH）的减少来检测细胞凋亡。GSH对于维持细胞的氧化还原水平很重要，它参与许多细胞过程，包括清除自由基，药物解毒，细胞信号传导和细胞增殖等。细胞中GSH浓度的降低是许多细胞死亡的早期标志。我们的Cell Meter 细胞内GSH检测试剂盒使用我们专有的ThiolTrace Violet500，当与硫醇（包括细胞中的GSH）反应时，它会发出强烈的荧光。在正常细胞中，该探针是高度荧光的，而在凋亡细胞中，染色强度会大幅度降低。用ThiolTrace Violet染色的细胞可以用流式细胞仪（Pacific Orange 滤光片组）观察。该试剂盒可与其他试剂（例如7-AAD（＃17501）一起使用，用于细胞活力和凋亡的多参数研究。该试剂盒经过优化，可通过流式细胞仪筛选凋亡激活剂和抑制剂。

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适用仪器

实验方案

简要概述

用5×10⁵到1×10⁶细胞/ mL 的密度制备含测试化合物的细胞

准备ThiolTrace Violet 500工作溶液并将其添加到细胞中

在37℃孵育20至30分钟

在Ex / Em = 405/525 nm处读取荧光强度（Pacific Orange滤光片组）

溶液配制

储备溶液配制

ThiolTrace Violet 500储备液（500X）：
在ThiolTrace Violet 500 的小瓶中加入200 µL DMSO（组分C）。注意：分装并在-20℃储存未使用的ThiolTrace Violet 500，避免反复冷冻/解冻循环。

工作溶液配制

ThiolTrace Violet 500工作溶液（1X）：
将2 µL ThiolTrace Violet 500储备溶液添加到1 mL的测定缓冲液（组分B）或您自备的缓冲液中，并充分混合。注意：ThiolTrace Violet 500 工作溶液可以在含有血清的细胞培养基中制备。

操作步骤

1. 对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，在使用ThiolTrace Violet 500工作溶液孵育之前，用含血清的培养基洗涤细胞一次。 注意：最佳孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。
2. 将细胞以1000 rpm的速度离心4分钟，然后用1 mL缓冲液（可选）洗涤细胞。
3. 将细胞重悬于1 mL ThiolTrace Violet 500工作溶液中，并在37℃的培养箱中孵育20至30分钟。
4. 使用Pacific Orange滤光片组（Ex / Em = 405/525 nm），用流式细胞仪检测荧光强度。

图示

图1.在HL-60细胞中加入喜树碱后，ThiolTrace Violet 500的荧光强度降低。 将HL-60细胞在37℃，5％CO₂培养箱中在无（红线）或20μM喜树碱（绿线）下处理6小时，然后用ThiolTrace Violet 500染色20分钟。 使用带有Pacific Orange通道的ACEA NovoCyte 3000流式细胞仪测量荧光强度。

参考文献

Cell-based assay using glutathione-depleted HepaRG and HepG2 human liver cells for predicting drug-induced liver injury
Authors: Xu, J., Oda, S., Yokoi, T.
Journal: Toxicol In Vitro (2018): 286-301

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