Amplite NAD检测试剂盒 （荧光法）蓝色荧光

Amplite NAD检测试剂盒 （荧光法）蓝色荧光

	货号	15280	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	4584
	Ex (nm)	422	Em (nm)	466
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite NAD检测试剂盒 （荧光法）蓝色荧光是美国AAT Bioquest研发的检测NAD的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）及其氧化形式（NAD）是活细胞中发现的许多酶反应的必需辅助因子。 量化这些因子的产生或消耗是监测酶介导的反应或筛选这些酶反应的调节剂或底物的重要方法。 市场上有几种用于量化NADH或总NAD / NADH量的试剂盒，但是迄今为止在大量过量NADH存在下检测NAD是非常具有挑战性的，因为NAD在259 nm处具有其吸收峰且不发荧光， 使测量不实用。

Amplite 荧光NAD分析试剂盒可便捷，快速地检测NAD。 该试剂盒使用我们新开发的NAD传感器Quest Fluor NAD试剂直接测量NAD。 该试剂盒中使用的专有探针仅与NAD反应产生在Ex / Em = 420 / 480nm处荧光的产物，并且对NADH几乎没有响应。 该试剂盒可在100μL测定体积中检测少至30 nM的NAD，并在过量的NADH存在下监测0.3％的NAD产生。 该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且可以用于高通量筛选。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的NAD检测试剂盒。 

产品说明书

96孔板检测示例

概述

准备NAD标准品或测试样品（50μL）

添加20μLQuestFluor NAD探针添加20μL

测定溶液在室温下孵育10-20分钟

添加15μL增强剂溶液

在室温下孵育10-20分钟

监测420/480 nm的荧光 

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分。

 

操作步骤

1.准备NAD库存解决方案：

将500μlddH2 O加入到NAD标准品（组分D）的小瓶中以制备1mM NAD储备溶液。

注意：未使用的NAD储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20 ℃。

 

2.准备NAD标准品的系列稀释液（0至10μM）：

2.1将10μLNAD储备溶液（来自步骤1）加入990L H2O或PBS缓冲液中以产生10M NAD标准溶液。

注意：稀释的NAD标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

2.2取200μL10μMNAD标准溶液，在H2O或PBS中进行1：3连续稀释，得到NAD标准品的10,3,1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μM连续稀释液。

2.3如表1所述，将50μL系列稀释的NAD标准品和含有NAD的测试样品加入黑色/固体底96孔微孔板中：

 

表1在黑色/固体底96孔微孔板中的NAD标准品和测试样品的布局

BL	BL	TS	TS
NS1	NS1	….	….
NS2	NS2
NS3	NS3
NS4	NS4
NS5	NS5
NS6	NS6
NS7	NS7

注1：NS = NAD标准，BL =空白对照，TS =测试样品。

注2：将连续稀释的NAD标准品从10μM加到0.01μM加入NS1至NS7的孔中，一式两份。

 

3.运行NAD测定：

 

3.1将20μLQuestFluor NAD探针（组分A）溶液加入NAD标准品，空白对照品和测试样品的每个孔中，充分混合。

3.2将20μL测定溶液（组分B）加入每个孔中，充分混合。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和10μLQuestFluor™NAD Probe和10μLAssaySolution。

3.3在室温下孵育反应10-20分钟，避光。

3.4向每个孔中加入15μL增强剂（组分C），使总NAD测定体积为105μL/孔，并在室温下孵育10-20分钟，避光。

注意：对于384孔板，添加7.5 uL增强剂。

3.5使用荧光板读数器在420/480 nm处检测荧光增加。

 

数据分析

        空白孔中的荧光（仅用H 2 O或PBS缓冲液）用作对照，并从具有NAD反应的那些孔的值中减去。 NAD标准曲线如图1所示。

图1.使用Germini酶标仪（Molecular devices），在96孔黑色/固体底板中用Amplite ™荧光NAD测定试剂盒测量NAD剂量反应。 A：NAD标准曲线，在孵育20分钟时可检测到低至30nM的NAD（n = 3）。 B：NAD和NADH响应的比较C：在溶液中存在100μMNADH的NAD标准曲线。 从孵育20分钟（n = 3）可以检测到从NADH转化的低至0.3％的NAD（~300nM）。

 

参考文献

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