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Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒 黄色荧光
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货号 | 11950 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 500 Tests | 价格 | 1944 | |
| Ex (nm) | 405 | Em (nm) | ||
| 分子量 | 溶剂 | |||
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶的试剂盒，碱性磷酸酶是用于ELISA，免疫组织化学，Northern，Southern和Western印迹应用的高度灵敏的酶。 它广泛用于各种生物测定（特别是免疫测定）和基于ELISA的诊断。 这种Amplite 碱性磷酸酶检测试剂盒使用pNPP（一种生色磷酸酶底物）来定量溶液，细胞提取物以及固体表面（如PVDF膜）上的碱性磷酸酶活性。 该试剂盒通过我们优化的“混合和读取”测定方案提供所有必需组分，该方案与HTS液体处理仪器兼容。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒。
适用仪器
| 光吸收酶标仪 | |
| 吸收： | 400nm |
| 推荐孔板： | 透明底板 |
产品说明书
样品实验方案
简要概述
1.准备碱性磷酸酶标准品和/或测试样品（50μL）
2.添加ALP工作溶液（50μL）
3.在室温或37°C孵育10 – 30分钟
4.监测400nm处的吸光度增加
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 pNPP储备液（100X）：
将300μL蒸馏水加入pNPP小瓶（组分A）中。 好好混合。 应立即使用pNPP储备溶液。 注意：如果妥善保存，解决方案应该有效期为3-4周。
1.2 碱性磷酸盐标准溶液：
添加100μL含0.1％BSA（H2O-0.1％BSA）的蒸馏水至碱性磷酸酶标准品（组分C，10单位），以产生100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液。
2.标准溶液
碱性磷酸盐标准
将10μL100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液加入990μLH2O-0.1％BSA中，生成1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液。 然后取100μL的1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液进行1:10稀释，得到100 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液（AS7）。 然后进行1：3连续稀释以获得剩余标准品（AS6-AS1）。 注意：应丢弃未使用的稀释碱性磷酸酶标准溶液部分。
3.工作溶液
将50μLpNPP储备溶液（100X）加入5mL测定缓冲液（组分B）中，使总体积为5.05mL的pNPP工作溶液。
样品操作及分析
表1.碱性磷酸酶标准品和白色/透明底96孔微孔板中的样品的布局。 AS =碱性磷酸酶标准品（AS1-AS7,0.1至100 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品
| BL | BL | TS | TS |
| AS1 | AS1 | … | … |
| AS2 | AS2 | … | … |
| AS3 | AS3 | ||
| AS4 | AS4 | ||
| AS5 | AS5 | ||
| AS6 | AS6 | ||
| AS7 | AS7 |
表2.每个孔的试剂组成
| 孔 | 容积 | 试剂 |
| AS1-AS7 | 50ul | 连续稀释（0.1至100 mU / mL） |
| BL | 50ul | H2O-0.1％BSA |
| TS | 50ul | 测试样品 |
1.在上清液中：
1.1根据表1和2中提供的布局制备碱性磷酸盐标准品（AS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。
1.2向碱性磷酸盐标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLpNPP工作溶液，使总碱性磷酸盐测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLpNPP工作溶液，总体积为50μL/孔。
1.3将反应在所需温度下孵育10至30分钟，避光。
1.4用吸光度读板仪在400 nm处监测吸光度的增加。
2.在细胞中：
2.1根据需要处理细胞。
2.2将等体积的pNPP工作溶液加入每个细胞孔（例如100μL/ 96孔板或50μL/ 384孔板）中。 注意：或者，从细胞板中取出生长培养基，用5 mL蒸馏水稀释5 mL工作溶液。 然后向细胞孔中加入100μL（对于96孔板）或50μL（对于384孔板）1：1稀释的工作溶液。
2.3将反应在所需温度下孵育30至60分钟，避光。
2.4用吸光度读板仪在400 nm处监测吸光度的增加。
参考文献
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