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mNSET 小鼠装置 60010 非手术胚胎移植说明
产品信息
目录号 #60010
EtO（环氧乙烷）灭菌处理
每盒 10 个设备（设备单独包装，每个密封袋中有 1 个小窥器和 1 个大窥器。）
信息：非手术胚胎移植方法和装置9,615,903。 [ PDF ]
有可能的使用
该装置用于将小鼠胚胎经子宫颈移植到受体雌性小鼠中。仅用于研究目的。 不适用于人类或动物的诊断或治疗用途。
其他用途：mNSET 60010 设备还可用于人工授精 (AI) 或其他材料/病原体转移到受体雌性小鼠中。
处理
设备仅供一次性使用。使用后丢弃。
在 mNSET 胚胎移植之前
为了生产用于移植的小鼠胚胎和作为受体的假孕雌性，使用标准的转基因方法。¹ 与标准转基因程序中的雄性和雌性小鼠交配。如果需要，女性捐赠者可以超排。胚胎在 EmbryoMax® KSOM 培养基 (Millipore#MR-106-D) 或所需的培养基中培养。在 mNSET 移植当天，胚胎应在性交后 3.5 天（3.5 dpc）；受体雌性小鼠在 mNSET 转移当天应为 2.5 dpc。
mNSET 演示视频
可以在此处查看和下载快速程序和完整程序演示视频。快速程序视频演示了使用 mNSET™（非手术胚胎和精z移植）小鼠装置 60010 可以轻松完成小鼠子宫胚胎移植。完整的程序视频详细介绍了整个设置和准备，直至实际程序结束.
胚胎移植程序
1. 将 15μl 培养基滴到 60 毫米组织培养皿（Falcon 353002 或类似产品）的盖子上。
2. 使用标准胚胎处理移液器将 12–20 个囊胚加载到培养基中。（注意：要移植的最佳胚胎数量会因小鼠品系和胚胎接受的操作而异。）
3. 将 mNSET 装置放在已设置为 1.8μl 的 P-2 Pipetman 上。（推荐的移液器是 Pipette Rainin Classic PR2，0.1-2μl 或 Gilson Pipetman P2，0.2-2μl。）
4. 将移液器柱塞按到第一次停止，将 mNSET 装置的降低到培养基中，然后将胚胎慢慢拉入尖。从介质中取出 mNSET 设备尖。
5. 小心地将移液器设置为 2.0μl，在 mNSET 尖产生一个小气泡，以帮助确保胚胎在插入鼠标期间留在设备尖内。轻轻地将装有吸头的移液器放在一边（靠近笼子），以便在第 9 步中使用。避免推挤 mNSET 尖。
6. 将未麻醉的雌性接受者放在带有金属丝架的笼子顶部，让鼠标“抓住”笼杆表面。用拇指和食指抓住尾巴根部，将尾巴向上倾斜，同时用手的另一边轻轻按压尾巴根部。（见下图。）
7. 将小窥器轻轻放入小鼠阴道。
8. 可选：取下小窥器，换上大窥器。如果需要，使用足够的光源并观察子宫颈。
9. 如步骤 6 所述，用一只手握住雌性鼠标，小心地拿起移液器，然后将 mNSET 设备尖轻轻插入窥器并穿过子宫颈。一旦 mNSET 设备集线器接触窥器，通过将柱塞压到第一站来排出胚胎。
10. 在不松开移液管柱塞的情况下轻轻取出 mNSET 装置并取出窥器。将鼠标放回笼中。不需要术后监测。
参考
¹Behringer R、Gertsenstein M、Nagy KV、Nagy A. 2014 年。 操纵小鼠胚胎：实验室手册，第四版。冷泉港（纽约）：冷泉港实验室出版社。
本产品仅供研究使用。
注意：不适用于人类或动物的诊断或治疗用途。
购买不包括或携带任何将本产品作为独立产品或作为另一产品的组件转售或转让的权利。
PARATECHS 公司有限保修
ParaTechs 保证，在发货时，产品将符合产品随附的规格。本保证限制了 ParaTechs 更换产品的责任。PARATECHS 对产品不作任何其他明示或暗示的保证；包括对任何特定用途的适销性或适用性的任何保证，或者产品不会侵犯任何第三方的任何专有权利。
用于小鼠的 mNSET 装置 60010 有用的提示
以下是来自我们的科学家、技术人员和客户的提示和建议，这些提示和建议已被证明是有帮助的。
1. 在开始 mNSET 试用之前，请仔细阅读所有“有用的提示”和 mNSET for Mice 60010 说明插入。 在 NSET 的每个盒子中都可以找到说明插页。
2.在实际实验之前，在没有胚胎的 2.5 dpc 假孕小鼠上练习 mNSET 技术。
3. mNSET 设计为紧贴在 Rainin Classic PR2, 0.1-2µl 或 Gilson Pipetman P2, 0.2-2µl 移液器上，用于装载胚胎和将培养基精确测量到设备的尖。
4.我们建议使用有意识、冷静和不激动的小鼠。这样可以更容易地让鼠标处于自然位置以找到并进入子宫颈。我们网站上视频中的雌性老鼠没有被镇静。
5.我们使用 CD1 小鼠，并强烈建议将这种品系用于您的假孕受体。我们建议使用体重≥26g 且至少 60 天大的小鼠。
6.胚胎应培养到囊胚阶段 (e3.5)，因为该装置将它们转移到子宫角之一而不是输卵管。一些最终用户已成功使用桑椹胚。
7.选择一种您使用过的培养基，它能让您在胚胎孵化过程中取得最大成功。例如，使用 M2 或 KSOM 培养基并转移 12 到 20 个胚胎。
8. mNSET 装置只能在假孕小鼠的某些发情期和 2.5 dpc 时通过子宫颈。因此，我们强烈建议使用 2.5 dpc 假孕小鼠（在插头脱落后）进行训练和使用 mNSET 设备进行胚胎移植。
9.我们发现通过将鼠标放在带有金属丝架的笼子顶部，让雌性保持静止并减少蠕动相对容易，这样她就可以抓住笼杆表面。使用 mNSET 说明 #6 中描述的保持技术，并在我们网页上的 mNSET 视频中进行演示：https ://paratechs.com/collections/art-devices/products/nset-device-formice#mnset-60010 -视频。
10. 我们不推荐使用润滑剂。您可以使用无菌水或培养基润湿窥器，然后在插入阴道之前抖掉多余的部分。
11.将小窥器轻轻插入阴道。鼠标会先天地将窥器推出一点。轻轻将其按回原位，以便 mNSET 装置可以穿过子宫颈并进入其中一个子宫角。
12.可选：取下小窥器，换上大窥器。如果需要，使用足够的光源，例如鹅颈灯，并观察子宫颈。
13.使用 NSET 尖找到并刺入子宫颈时，请耐心等待，不要施加太大压力。这可能会导致组织损伤，并且可能会弯曲 mNSET 设备尖，使其几乎无法使用。如果第一次尝试插入 mNSET 的位置不正确，请轻轻地重新定位设备并重复。
14.如果在寻找宫颈开口时施加的压力过大导致尖弯曲，则可能会导致胚胎丢失。同样，温和的重复尝试与 mNSET 的成功有关。
15.当 mNSET 设备的轮毂接触到窥器末端时，您就会知道设备已通过子宫颈正确插入子宫。
16.要排出胚胎，请将移液器柱塞按到第一档。数到 3。不要松开柱塞。
17. 在 不松开移液管柱塞的情况下缓慢取出 mNSET 。如果在移除之前释放柱塞，一些胚胎可能会被拉回尖。
18.使用后在显微镜下检查 mNSET 尖是一种很好的做法。清晰的尖 mNSET 允许在尖内部进行可视化。
该设备专为一次性使用而设计。重复使用会用宫颈组织堵塞 mNSET 尖。重复使用可能会使导管变得柔韧，并且不再足够坚硬以通过子宫颈。因此，可能将胚胎存放在阴道中，而不是按预期放置在子宫角中。
用于小鼠的 mNSET 设备 60010 常见问题解答
1. 我可以重复使用 mNSET 设备将胚胎移植到多只小鼠中吗？
ParaTechs 不建议使用 mNSET 设备进行多次传输。来自小鼠生殖道的组织往往会堵塞导管。重复使用还会使导管变得柔韧，不再足够坚硬以通过子宫颈，从而将胚胎存放在阴道中。当设备多次使用时，胚胎移植的成功率可能会明显下降。
2. 我应该使用什么小鼠品系作为我的胚胎受体？
ParaTechs 推荐 CD1 或 ICR 小鼠。为获得最佳效果，接受者的体重应≥ 26 克且年龄应超过 60 天。
3. 受体小鼠应在性交后（dpc）哪天？
我们强烈建议使用2.5 dpc 假孕小鼠进行训练和使用 mNSET 设备进行胚胎移植。mNSET 设备有可能通过假孕小鼠 1.5 dpc 的子宫颈。然而，当时胚胎移植的成功率已证明低于使用推荐的 2.5 dpc 假孕女性。
4. 我的胚胎应该在哪个发育阶段进行移植？
胚胎应该比假孕女性的生殖道处于更晚的发育阶段。例如，囊胚（受精后 e3.5 天）应转移到 2.5 dpc 假孕受体中。
5. 执行 mNSET 程序是否需要麻醉？
没有。ParaTechs 不建议使用麻醉。可以放置一个平静有意识的动物，以便 mNSET 装置导管可以轻松通过子宫颈。我们网站上演示视频中的鼠标没有被麻醉：https : //paratechs.com/collections/art-devices/products/nset-device-for-mice#mnset-60010-videos。使用未麻醉的小鼠还可以使手术更快、更容易，同时消除麻醉的风险和压力。¹ 麻醉可能有助于训练目的，但不需要在普通条件下使用。
6. 在 mNSET 过程中我应该使用润滑剂吗？
不会。润滑剂会堵塞 mNSET 导管并阻止胚胎正确放置在子宫角中。在插入之前，窥器可能会用无菌水或培养基润湿，但这也是不必要的。如果弄湿了窥器，在将设备插入阴道之前一定要抖掉多余的水分。
7. 我无法定位和穿过子宫颈。我该怎么办？
确保您的受体女性是 2.5 dpc 假孕。在插入 mNSET 导管之前，使用鹅颈灯检查和定位宫颈开口，因为这将帮助您正确定位设备。在尝试胚胎移植之前，练习穿过 2.5 dpc 假孕女性的子宫颈可能会有所帮助。
8. 我应该将多少胚胎移植到每只受体小鼠中？
对于大多数转移，ParaTechs 建议将12-20 个胚胎转移到每只受体小鼠。（注意：移植的最佳胚胎数量会因小鼠品系和胚胎接受的操作而异。）
9. 我进行了非手术胚胎移植，但是当我移除 mNSET 装置时，导管弯曲了。发生了什么？
弯曲的导管可能意味着导管没有进入子宫颈，或者您在尝试定位子宫颈开口时施加了太大的压力。如果导管弯曲，则胚胎不太可能沉积到小鼠的子宫角中。定位宫颈口时使用温和的压力很重要。
10. 我可以多次使用小鼠作为胚胎受体吗？
ParaTechs 的研究表明，可以对女性接受者执行多个 mNSET 程序并获得多达三窝。然而，第一胎后妊娠率和胚胎移植效率有所下降。
11. mNSET 设备可以用于人工授精 (AI) 吗？
是的。mNSET 设备也可用于将精z输送给受体雌性小鼠以促进 AI。² 请参阅下面由 Stone 等人撰写的文章。(2015)。
12. mNSET设备是否有其他应用？
是的。mNSET 设备还可用作有效转移物质以用于子宫生理学和细菌感染研究的新方法