EAE 模型诱导手册
EAE 模型诱导手册：
EAE模型是一种以特异性致敏的CD4+T细胞介导为主的，以中枢神经系统内小血管周围出现单个核细胞浸润及髓鞘脱失为特征的自身免疫性疾病，是人类多发性硬化（MS）的理想动物模型，在临床神经免疫学的研究中具有重要意义。
实验动物的选择：成年雌鼠C57/BL6小鼠 8周 15只
试剂准备
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产品 |
货号 |
包装 |
数量 |
品牌 |
购买单价 |
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MOG (35-55)多肽蛋白 |
AS-60130 |
5 mg |
1 |
AnaSpec |
4545 |
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百日咳毒素 |
list181 |
50µg |
1 |
listlabs |
3300 |
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结核菌素H37Ra |
231141 |
100mg |
1 |
BD |
5000 |
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弗氏不*佐剂 |
8642862 |
10ml |
2 |
Mpbio |
150 |
器材准备
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器材名 |
数量 |
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无菌陶瓷研钵 |
1个 |
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5ml玻璃注射器 |
1个 |
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振荡器 |
1个 |
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28G一次性注射针头 |
1盒 |
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18G一次性注射针头 |
1盒 |
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1ml一次性注射器 |
1盒 |
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一次性三通管 |
1个 |
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一次性塑料试管 |
1包 |
试剂配制：
1：髓鞘少突胶质细胞糖蛋白MOG (35-55)配制： 将AnaSpec公司的MOG (35-55)多肽蛋白溶于PBS中，浓度为2mg/ml
2: 准备*弗氏佐剂（CFA）：将BD公司的结核菌素H37Ra粉末溶于MPBIO公司的弗氏不*佐剂而成（终浓度为4MG/ML）
称取80mg结核菌素H37Ra粉末与不*佐剂混合，注意每次加入一点点不*佐剂，在研钵中充分研磨保证结核菌素*悬浮。
3:将配好的MOG (35-55)溶液和*弗氏佐剂1：1混合（MOG终浓度为1MG/ML),保存于4度冰箱，并于24小时内使用
5：百日咳毒素（PTX）配制： 取一只listlabs公司的百日咳毒素粉末，在管子中加入500ulPBS溶液，浓度为100ug/ml,保存于4度冰箱,使用前再用PBS稀释100倍
实验步骤：
1：*天：小鼠胸腹部皮下注射接种MOG和Mtb/CFA混合液 ，复测2-4个点，共150ul/只。再腹腔注射稀释后的百日咳毒素溶液（浓度为1ug/ml）200ul/只
2：第三天：再加强注射百日咳毒素溶液（浓度为1ug/ml）200ul/只