Cisbio Bioassays公司 HTRF 技术

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Cisbio Bioassays公司所销售的基于HTRF技术的产品包括：IP1, cAMP, Cellul’erk 以及Tag-lite™细胞表面受体平台。这些业务将会通过IBA集团旗下的IBA中国分公司（www.htrf-china.cn）来操作。为了在亚洲市场拓展应用于癌症诊断和治疗方面的放射药物产品、仪器和方法, IBA集团于2007年建立了IBA中国公司   上海金畔公司专注于为制药和生物技术实验室提供相关商品。 价格查询请上www.jinpanbio.com

HTRF 技术介绍

HTRF（均相时间分辨荧光）是用来检测均相体系中待测物的一种zui常用的方法，是用来研究药物靶标的理想的平台。这种技术结合了荧光共振能量转移（FRET） 和时间分辨技术（TR）。在TR-FRET实验中，当供体和受体相离很近时，在供体和受体之间会有荧光共振能量转移而产生信号。采用双波长检测能够显著减小缓冲液和培养基的干扰，zui终的信号跟产物形成的量成比例。

HTRF技术被广泛应用于基于细胞实验和生化实验的药物研发的不同阶段，从实验开发，lead到hit，高通量筛选（HTS），到临床前研究。这是一种很灵敏且稳定的技术，可以使用384和1536孔板。自从10年前HTRF技术进入药物研发领域以来，研究者采用该技术加快了很多基于抗体的研究，包括GPCR（配体结合，受体二聚化，cAMP 和IP-1 的检测，以及磷酸化ERK的定量）, 激酶，细胞因子和生物标志物，生物过程（抗体和蛋白生产），以及蛋白和蛋白，蛋白和多肽，蛋白和DNA/RNA相互作用的实验。HTRF技术也可以取代大部分ELISA，因为HTRF具有同等的检测范围和检测极限，而且更节省实验时间，并且不需要洗板的步骤。

HTRF也是基于TR-FRET的化学技术,但它的许多特点把它与其他TR-FRET产品区分开来。其中一个特点就是由于使用了镧系元素，从而具有非常长的半衰期（铕和铽），镧系元素与络合的穴相结合，这种结合的穴状物与其他所有TR-FRET产品使用的螯合技术相比能增加实验的稳定性，另外使用化的比值测量能矫正干扰因素。其他HTRF ®技术的特点包括：

• 均质性（不需要洗板）
  
• 低背景
  
• 实验体积的小型化很简捷
  
• 化合物和培养基的干扰小
  
• 对一些添加剂如DMSO和EDTA的耐受性
  
• 与许多读扳机相兼容

总体而言，HTRF在生物分子检测和定量方面是相当灵敏和稳定的技术，可以广泛应用于药物研发领域.

详细技术特点

穴与螯合物
穴的形成是将一个阳离子纳入到一个立体笼中。笼能收集光然后将能量转移到核心的镧系元素。这个大环的这些性质有利于跟镧系元素紧密相连，这种不可破的连接会形成异常稳固的复合体。这种穴结构能抵抗一些特殊的实验条件如大量存在的阳离子（Mg2 +和Mn2 +等），螯合物（EDTA），溶剂或者温度。从HTRF 能应用到临床诊断（TRACE®技术和Kryptor®工作站技术）就能看出它也适用于浓度高的血清（50%）。在读板前或者孵育时加入氟离子能增强实验对大量化合物的抗干扰性。

以铀氨基丁三醇穴（TBP铀）为例，双吡啶的一部分增加活化参数达到大约25-30kcal/mole 的ΔG*。因此穴结构分子能被用于恶劣的化学条件，例如在固相肽类合成过程中，穴结构分子在存在的固相化学和反相色谱中非常稳定，而不用考虑铀会从笼中分离。作为对比的是螯合物跃迁很容易达到0-10 kcal/mole的ΔG*，例如羧酸根部分质子化。这就解释了为什么螯合物跟穴结构分子不一样，在酸性介质中不稳定，稀有金属离子容易被介质中的离子如锰置换。

时间灵活和实验安全
如果仪器坏了，在一段时间之后仍然可以读板。HTRF结果能持续7天以上保持稳定且较大的实验窗口。

动力学研究
穴没有光漂白性，多次读数后信号没有损失。因此能按照需要的次数去读，这就给许多实验的动力学检测提供了可能。

灵活的实验模式
许多化学和生物添加剂，如带血清的培养液，牛血清白蛋白，二甲基亚砜，去污剂，酶的淬灭剂（EDTA），对实验测量没有干扰因而给实验提供了很大的灵活性。