上海金畔生物脂多糖提取试剂盒等你来拿！
上海金畔生物脂多糖提取试剂盒等你来拿！
LPS Extraction Kit 脂多糖提取试剂盒
iNtRON17141 100 Prep
脂多糖（LPS）是革兰氏阴性菌外膜的主要成分。其功能包括抗吞噬、抗血清、外膜通透性屏障和作为某些噬菌体吸附受体。热酚水提取法是提取脂多糖的常用方法，但提取时间长，步骤复杂。当我们试图操纵如此少量的细胞时，这种方法有很大的局限性。LPS提取试剂盒是专为快速、简便地从细菌细胞中提取LPS而设计的，广泛适用于不同的革兰氏细菌，适合于细胞数量较少的情况。首先。细菌细胞被有机溶液溶解。细胞膜的磷脂和蛋白质成分被破坏，细胞成分在溶液中释放。第二步。用高盐浓度溶液纯化释放细胞组分中的脂多糖。第三步。对于高质量的脂多糖，洗涤和洗脱盐通过洗涤步骤被简单地除去 。
•广泛应用于不同的革兰氏阴性菌中
•仅需60分钟即可提取出脂多糖
•可重复地获得较高的脂多糖产量
储存：
在4℃下储存，然后稳定至少一年。
试剂盒包含：
LPS Extraction Kit 100 Preps
Lysis Buffer 100 ml Purification Buffer 80 ml
使用前配制溶液 ：
70%乙醇，
室温10mmTris-HCl缓冲液（pH8.0）
蛋白酶K溶液（30∏/ml）
LPS提取率与培养体积成正比当使用5ml培养物时，LPS的产率达到大值。我们不建议处理超过5毫升的细菌培养物。如果使用过量的培养液，将降低裂解率和产量，增加细胞蛋白对脂多糖的污染。通常，在OD600为0.8-1.2时，宜培养体积为2毫升。
为从细菌细胞中获得高纯度的脂多糖，用蛋白酶K处理，按以下步骤提取脂多糖。
协议：
1.在13000转/分钟的室温下离心，获得2-5毫升细菌细胞。注意：清除上清液的所有痕迹。对于成粒细胞，在使用前通过重复敲击试管*松开细胞颗粒。细胞颗粒的不*松动可能导致无效的溶解和降低产量。
2。加入1毫升裂解缓冲液，用力旋涡。注：为促进细菌细胞溶解，应大力旋涡直至细胞团消失。
3。加入200毫升氯方后，用力旋涡10-20秒。室温下孵育5分钟，注意：旋涡前观察试管。当加入氯方时，当氯方层向下移动时，会在上层（蓝色层）的正下方形成一条白线。这个区域包含细胞碎片、蛋白质、基因组DNA和RNA的混合部分。加入氯方的目的是分离酚层和水层，并终分离RNA和基因组DNA/蛋白质。
4。以13000转/分的转速在4℃下离心10分钟。将400毫升上清液移入新的1.5毫升试管中。注：上层移液时，注意形成白色沉淀物。
5。加入800ml纯化缓冲液，充分混合。在-20℃下孵育10分钟。注：本步骤的目的是从细胞的其他提取物（如蛋白质、核酸、脂质等）中纯化脂质6。在4℃下以13000转/分的速度离心15分钟后，除去上层以获得LPS颗粒。7号。加入1毫升70%乙醇，倒置试管2-3次，洗涤脂多糖颗粒。将混合物在4℃13000转/分下离心3分钟。丢弃上层并干燥剩余的LPS颗粒。
注：这是一个清洗阶段，用于去除杂质，如盐等。在RT.8干燥颗粒。将30–50毫升10毫升Tris HCl缓冲液（pH 8.0）加入到LPS颗粒和涡流管或移液管中。将LPS煮沸2分钟，使其*溶解。选择：用蛋白酶K处理，从细菌细胞中提取高纯度的LPS。每1个LPS处理2.5㎍蛋白酶K，在50℃孵育30分钟。通常从大肠杆菌中提取30㎍LPS。
1.在13000转/分钟的室温下离心，获得2-5毫升细菌细胞。注意：清除上清液的所有痕迹。对于成粒细胞，在使用前通过重复敲击试管*松开细胞颗粒。细胞颗粒的不*松动可能导致无效的溶解和降低产量。
2。加入1毫升裂解缓冲液，用力旋涡。注：为促进细菌细胞溶解，应大力旋涡直至细胞团消失。
3。加入200毫升氯方后，用力旋涡10-20秒。室温下孵育5分钟，注意：旋涡前观察试管。当加入氯方时，当氯方层向下移动时，会在上层（蓝色层）的正下方形成一条白线。这个区域包含细胞碎片、蛋白质、基因组DNA和RNA的混合部分。加入氯方的目的是分离酚层和水层，并终分离RNA和基因组DNA/蛋白质。
4。以13000转/分的转速在4℃下离心10分钟。将400毫升上清液移入新的1.5毫升试管中。注：上层移液时，注意形成白色沉淀物。
5。加入800ml纯化缓冲液，充分混合。在-20℃下孵育10分钟。注：本步骤的目的是从细胞的其他提取物（如蛋白质、核酸、脂质等）中纯化脂质
6。在4℃下以13000转/分的速度离心15分钟后，除去上层以获得LPS颗粒。
7。加入1毫升70%乙醇，倒置试管2-3次，洗涤脂多糖颗粒。将混合物在4℃13000转/分下离心3分钟。丢弃上层并干燥剩余的LPS颗粒。
注：这是一个清洗阶段，用于去除杂质，如盐等。在RT.8干燥颗粒。将30–50毫升10毫升Tris HCl缓冲液（pH 8.0）加入到LPS颗粒和涡流管或移液管中。将LPS煮沸2分钟，使其*溶解。选择：用蛋白酶K处理，从细菌细胞中提取高纯度的LPS。每1个LPS处理2.5㎍蛋白酶K，在50℃孵育30分钟。通常从大肠杆菌中提取30㎍LPS。
Cell culture volume(OD600=1.0) 2㎖(109 cells)
Yield of LPS 30㎍
Amount of Proteinase K 75㎍(2.5㎕of 30㎎/ ml PK)