antibodies-online ABIN2014351说明书

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MMAE Antibody Drug Conjugate (ADC) ELISA Kit

MMAE抗体药物偶联物（ADC）ELISA试剂盒

目标

MMAE抗体药物偶联物（ADC）

 

反应性

化学制品

 

检测方法

比色法

方法类型

竞争ELISA

检测范围

0.0435-4000微克/毫升

检测限

0.0435微克/毫升

应用

酶联免疫吸附

目的

该测试试剂盒旨在定量测定测试样品中的抗体-MMAE-缀合物水平。对于MMAE抗体药物偶联物（ADC）的临床前和临床药理学研究非常有用。
该试剂盒可直接使用来自组织/细胞培养物的样品以及来自人，大鼠，小鼠，灵长类动物等的血清样品。-使用此试剂盒可测量基于人源化单克隆抗体的MMAE-ADC和基于小鼠单克隆抗体的MMAE-ADC成套工具。

牌

EDI™

样品类型

组织样本，血清

分析方法

定量的

交叉反应（详细信息）

此MMAE-ADC EIA与MMAF-ADC，DM1-ADC和DUO-6-ADC没有交叉反应。

组件

1.抗MMAE抗体包被的微孔板。一个微孔板，上面涂有十二乘八小条（总共96孔），并涂有特异性抗MMAE抗体。将板框起来并密封在带有干燥剂的铝箔拉链袋中。该试剂应在2-8°C下保存，并且在试剂盒上的有效期之前一直稳定。
2. HRP结合的MMAE。一个小瓶在稳定的蛋白质基质中包含3 mL即用型HRP标记的MMAE。该试剂应在2-8°C下保存，并且在试剂盒上的有效期之前一直稳定。
3. ELISA洗涤浓缩液。一瓶装有3 mL 30倍浓缩液。使用前，内容物必须用87毫升软化水稀释并充分混合。稀释后，产生一种工作洗涤溶液，其在磷酸盐缓冲盐水中包含表面活性剂以及非叠氮化物，非汞防腐剂。稀释后的洗涤溶液可以在室温下保存，并且在试剂盒上一直稳定到有效期。
4. ELISA HRP底物。一瓶装有15 mL过氧化氢的四甲基联苯胺（TMB）。该试剂应在2-8°C下保存，并且在试剂盒上的有效期之前一直稳定。
5. ELISA终止液。一瓶装有15 mL终止液。该试剂可在2-8°C或室温下保存，并且在试剂盒上的有效期之前一直稳定。
6.抗体-MMAE共轭零校准物。一个装有30mL零校正剂的小瓶（30711）。该试剂用于稀释校准储备tmake分析校准物，以及稀释测试样品。该试剂应在2-8°C下保存，并且在试剂盒上的有效期之前一直稳定。
7.抗体-MMAE共轭校准液。试剂盒中未提供（可选）一个小瓶（3071 
2.在无冻干剂的冻干（0.5 mL）血清基基质中包含标准抗体-MMAE-缀合物的储备液，请参阅该小瓶以获取有关其准确浓度的信息。该试剂应在2-8°C下保存，并且在试剂盒上的有效期之前一直稳定。

不含材料

1.抗体-MMAE共混物
2.能够输送2μL，50μL，100μL等的精密单通道移液器
3.适用于上述体积分配的一次性移液器吸头
4.铝箔
5.去离子水或蒸馏水
6.塑料微量滴定器孔盖或聚乙烯薄膜
7. ELISA多通道洗涤瓶或自动（半自动）洗涤系统
8.分光光度计酶标仪，能够读取450/650或450/2处的吸光度。纳米

 

 

• 测定时间

  4小时

  盘子

  预涂

  协议

  此EIA试剂盒是为定量测定血清中的MMAE偶联物而设计，开发和生产的。该测定利用竞争性免疫测定技术，该抗体具有仅与MMAE结合的抗体。测定校准物（抗体MMAE共轭物）和测试血清样品直接添加到涂有特异性抗MMAE抗体的微量滴定板的孔中。随后，将辣根过氧化物酶（HRP）共轭的MMAE添加到每个孔中。在温育期间，抗体MMAE缀合物与HRP缀合的MMAE竞争抗MMAE抗体的有限结合位点。形成了包被良好的抗-MMAE抗体HRP缀合的MMAE的免疫复合物。未结合的抗体和缓冲液基质在随后的洗涤步骤中被去除。为了检测这种免疫复合物，然后在定时反应中将孔与底物溶液孵育，然后用酸性试剂（即ELISA终止溶液）终止反应。然后在分光光度计酶标仪中测量吸光度。结合到每个微量滴定孔壁上的免疫复合物的酶促活性与测试样品中抗体-MMAE偶联物的量成反比。通过在4参数或log-logit曲线拟合上绘制每个校准器的吸光度与相应抗体-MMAE共轭物浓度的关系来生成校准曲线。直接从该校准曲线确定测试样品中抗体-MMAE缀合物的浓度。ELISA终止液）。然后在分光光度计酶标仪中测量吸光度。结合到每个微量滴定孔壁上的免疫复合物的酶促活性与测试样品中抗体-MMAE偶联物的量成反比。通过在4参数或log-logit曲线拟合上绘制每个校准器的吸光度与各自的抗体-MMAE缀合物浓度的关系来生成校准曲线。直接从该校准曲线确定测试样品中抗体-MMAE缀合物的浓度。ELISA终止液）。然后在分光光度计酶标仪中测量吸光度。结合到每个微量滴定孔壁上的免疫复合物的酶促活性与测试样品中抗体-MMAE偶联物的量成反比。通过在4参数或log-logit曲线拟合上绘制每个校准器的吸光度与各自的抗体-MMAE缀合物浓度的关系来生成校准曲线。直接从该校准曲线确定测试样品中抗体-MMAE缀合物的浓度。结合到每个微量滴定孔壁上的免疫复合物的酶促活性与测试样品中抗体-MMAE偶联物的量成反比。通过在4参数或log-logit曲线拟合上绘制每个校准器的吸光度与各自的抗体-MMAE缀合物浓度的关系来生成校准曲线。直接从该校准曲线确定测试样品中抗体-MMAE缀合物的浓度。结合到每个微量滴定孔壁上的免疫复合物的酶促活性与测试样品中抗体-MMAE偶联物的量成反比。通过在4参数或log-logit曲线拟合上绘制每个校准器的吸光度与各自的抗体-MMAE缀合物浓度的关系来生成校准曲线。直接从该校准曲线确定测试样品中抗体-MMAE缀合物的浓度。

  试剂准备

  （1）在使用前，让所有试剂达到室温。来自不同试剂盒批号的试剂不应合并或互换。
  （2）使用前必须将ELISA洗提液稀释至工作溶液。有关详细信息，请参见“试剂”部分。
  （3）使用EDI校准器：用0.5 mL去离子水重新配制校准液。稀释重建的校准原液将足够数量的抗MMAE抗体包被的微孔板放入支架中，以一式两份确定校准物和未知样品。

  检验程序

  （1）将100μL校准物和测试样品添加到微孔中。
  （2）安全地密封板孔，用箔纸或其他材料遮盖以防光照，然后在ELISA板振动器（小轨道半径）上以400至450 rpm的转速旋转30分钟。
  （3）立即向每个孔中加入25μLHRP共轭MMAE。（注意：添加HRP共轭MMAE之前无需执行洗涤步骤）
  （4）牢固密封板孔，用箔纸或其他材料遮盖以防光照，然后在ELISA板振荡器（小轨道半径）上旋转2个小时。400至450 rpm时10分钟。
  （5）通过向每个孔中分配350μL的工作洗涤溶液，将每个孔洗涤5次，然后*吸出内容物。或者，可以使用自动微孔板清洗机。
  （6）将100μLELISA HRP底物添加到每个孔中。
  （7）用铝箔或其他材料覆盖板，以避免暴露在光线下。在室温下静置板静置20分钟。
  （8）立即将100μLELISA终止溶液添加到每个孔中。轻轻混合。
  （9）读取450 nm处的吸光度。

  计算结果

  建议使用4参数或log-logit校准曲线拟合。
  1.计算每对重复测试结果对的平均吸光度
  2.校正曲线是通过所有校正剂水平在纵坐标上相对于校正剂浓度的校正吸光度生成的。应使用适当的计算机辅助数据缩减程序来计算结果。直接使用各自校正的吸光度从校准曲线中读取测试样品的抗体-MMAE缀合物浓度。

  测定精度

  通过在八次重复测定中测量三个校正剂（L3，L6和L8）来验证测定内的精密度。CV％为7.1％，6.7％和11.0％。

  限制

  仅供研究使用

• 使用注意事项

  试剂必须在专业实验室中使用。包含牛血清的试剂的原材料来自连续的48个美国。它仅从在兽医监督下饲养的健康供体动物中获得，并且没有发现传染性疾病。在进行此测定时，请戴上手套并处理这些试剂，就好像它们具有潜在的传染性一样。避免与含有TMB，过氧化氢或硫酸的试剂接触。TMB可能会刺激皮肤和粘膜，并引起皮肤过敏反应。TMB是可疑的致癌物。硫酸与皮肤接触可能会引起严重刺激。请勿进入眼睛，皮肤或衣服。不要摄入或吸入烟气。接触时，用大量水冲洗至少15分钟。使用良好的实验室规范。

  贮存

  4°摄氏度

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  目标

  MMAE抗体药物偶联物（ADC）

   

  目标类型

  抗体