用于询问同源修复 (HR) 通路的基于细胞的筛选试剂盒

人：HeLa 报告细胞系（包括 I-Sce1 转染）

SKU：DR3000-HRHeLa-Sce

分类：细胞背景 DNA 修复,同源重组报告细胞 标签：DNA 修复,同源重组, HR DNA 报告基因

用于询问同源修复 (HR) 通路（I-Sce1 转染）的基于细胞的筛选试剂盒

动物细胞中的 DNA 修复途径可分为两大类：HR 和 NHEJ。HR 或同源重组是次要途径，但在保护细胞免受基因毒性方面非常重要。HR 需要同源序列并且仅限于 S 期。基于特定报告基因的 HR 分析对于抗癌药物发现项目非常有益，可以更多地了解 DNA HR 修复过程以及建立交叉通路和可药物通路靶点。

这是一款基于 HeLa 细胞的报告试剂盒，旨在让客户筛选或识别影响或影响 HR DNA 修复过程的试剂（药物、天然产物、小分子、合成物、miRNA 和基因）。该试剂盒使用 GFP 作为HR 通路的原位读数。

DNA 不断暴露于基因毒剂，导致基因表达、一级序列、易位等发生变化，所有这些都是疾病的先兆。在各种形式的 DNA 损伤中，最危险的是 DNA 双链断裂 (DSB)，这主要是由于失去野生型序列以恢复基因组完整性。为了应对 DSB 带来的威胁，细胞已经开发出多种机制来检测、发出信号并修复 DNA。

两条主要途径，同源重组 (HR) 和非同源末端连接 (NHEJ)，参与 DSB 的修复。这些途径可以进一步细分为特定的子途径过程。这些途径在很大程度上彼此不同，并且以互补的方式发挥作用。虽然 NHEJ 不依赖于细胞周期，但 HR 强烈依赖于 S 期。NHEJ 涉及没有同源性的两个 DNA 末端的连接，并且往往容易出错，而 HR 具有高保真度并且基本上没有错误。在 HR（有时称为基因转换）中，与 DSB 两侧具有同源性的供体 DNA 序列提供遗传信息以修复断裂。同源序列被复制到断裂的基因座中，使修复的基因座成为供体序列的精确副本，而不改变供体序列（图 1）。

设计了一个基于细胞/细胞环境的系统，以允许研究人员检查和询问活 HeLa 细胞中的 HR 过程。HR 试剂盒使用双 GFP 盒，通过同源重组 (HR) 将 GFP 阴性细胞转化为 GFP 阳性细胞。由于野生型（同源）GFP 片段存在于 DNA 断裂附近，因此将通过 HR（作为基因转换）进行 DNA 修复。为了引入精确的 DNA 切割，巨型核酸内切酶 (I-Sce1) 在 Cassette 1 的 GFP 基因座中引入 DS 断裂（图 1）。值得注意的是，人类基因组不包含 I-Sce1 位点。因此，Cassette 1 中的 I-Sce1 位点意味着 DS 断裂仅发生在该精确位置，而不发生在基因组的其他位置。DS 断裂启动 HR，并使用 WT 序列作为同源模板（位于盒 2 中），基因转化为 WT，出现 GFP 阳性细胞（图 2）。HR 由 DS 断裂触发，这是通过用 I-Sce1 表达质粒转染细胞实现的（图 2）。该技术适用于活细胞成像（通过跟踪单个 GFP+ 细胞）。实时成像为这些细胞中的 HR 分析提供了基本的单细胞分辨率。此外，可以追踪 DNA 修复的后代，因为这些细胞也是 GFP 阳性的。有关实时成像的更多详细信息，请参阅下面的视频。实时成像为这些细胞中的 HR 分析提供了基本的单细胞分辨率。此外，可以追踪 DNA 修复的后代，因为这些细胞也是 GFP 阳性的。有关实时成像的更多详细信息，请参阅下面的视频。实时成像为这些细胞中的 HR 分析提供了基本的单细胞分辨率。此外，可以追踪 DNA 修复的后代，因为这些细胞也是 GFP 阳性的。

细胞背景 DNA 修复

1. HR-HeLa 细胞准备在 T-25 瓶中培养或作为冷冻细胞沉淀（客户可以要求）。我们向希望储存细胞以备将来使用的客户提供冷冻细胞。我们还可以将活细胞发送给希望立即开始使用该生产线的客户。

2. I-Sce1 基因表达质粒。

3. 详细的协议描述了如何设置和使用该试剂盒来检测所提供的细胞宿主中的 HR 机制。