钙离子荧光探针Cal Red R525/650 AM

简要概述

关键参数

仪器：荧光酶标仪

Ex:490

Em:525/660

Cutoff:515/630

推荐孔板：黑色孔板

仪器：荧光显微镜

通道：FITC

推荐孔板：黑壁透明底

仪器：流式酶标仪

Ex比率： FITC/PerCP

Em比率：FITC/PerCP

产品介绍

        细胞内钙通量测定是一种广泛使用的监测GPCR和钙通道活性的方法。为了量化细胞内钙浓度，比率荧光钙指示剂是优选的，因为该比例与钙浓度直接相关并且与细胞数量和染料负载浓度无关。然而，流行的比率钙指示剂（例如Fura-2和Indo-1）具有某些限制，例如较低的灵敏度，UV激发，并且与HTS筛选过滤器组不兼容。Cal Red R525 / 650已被开发为新的488 nm可激发的比率荧光钙指示剂。Cal Red R525 / 650是弱荧光的，一旦进入细胞，亲脂性AM阻断基团被细胞内酯酶切割，导致带负电的荧光染料在细胞中保持良好，激发接近488nm，两次发射在525nm和650nm。当用生物活性化合物刺激细胞时，该受体启动细胞内钙的释放，其被Cal Red R525 / 650螯合。当在488nm激发时，发射信号在525nm处增加并在650nm处减小。Cal Red R525 / 650的激发和发射波长与普通滤光片组兼容，对细胞的损伤 小，使其成为评估和筛选GPCR激动剂和拮抗剂以及钙通道靶标的有力工具。由Cal Red R525 / 650螯合。当在488nm激发时，发射信号在525nm处增加并在650nm处减小。Cal Red R525 / 650的激发和发射波长与普通滤光片组兼容，对细胞的损伤 小，使其成为评估和筛选GPCR激动剂和拮抗剂以及钙通道靶标的有力工具。由Cal Red R525 / 650螯合。当在488nm激发时，发射信号在525nm处增加并在650nm处减小。Cal Red R525 / 650的激发和发射波长与普通滤光片组兼容，对细胞的损伤 小，使其成为评估和筛选GPCR激动剂和拮抗剂以及钙通道靶标的有力工具。

产品活细胞中的实验方案（点击查看）

产品说明书

操作说明

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Cal Red R525 / 650 AM储备液。
2.1Cal Red R525 / 650 AM使用量：1毫克
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Cal Red R525 / 650AM与-454.13μL无水DMSO混合。

3.使用10μMCalRed R525 / 650 AM 4,0.08％Pluronic®F-127和2 mM Probenecid在HHBS中制备2X工作溶液。
3.1Cal Red R525 / 650 AM的 终孔内浓度：5μM
3.2Pluronic®F-127的 终孔浓度：0.04％
3.3 终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μL的Cal Red R525 / 650AM，25.6μL的10％Pluronic F-127和256μL的25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议Cal Red R525 / 650 AM的 终浓度为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127孔浓度 终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的 终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的 终浓度调节至以下：5μMCalRed R525 / 650 AM，0.04％Pluronic F-127,1mM丙磺舒。

5.孵育染料加载板

5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。 接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。

8.运行实验。
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 492/650 nm运行实验。