ALSTEM CILV02说明书

ALSTEM是一家位于湾区的早期生物技术公司，拥有快速扩展的产品和服务组合，为生物制药和学术机构提供服务。受到加利福尼亚干细胞研究承诺的启发，ALSTEM于2012年由具有iPS细胞重编程和基因组编辑技术专业知识的科学家创立。

hTERT Cell Immortalization Kit: #CILV02

hTERT细胞永生化试剂盒：＃CILV02

描述

*，原代细胞仅在培养中经历预定的和有限数量的细胞分裂。在有限的群体倍增（其数量因物种，细胞类型和培养条件而异）之后，原代细胞进入一种状态，即所谓的复制衰老，它们不再分裂。为了超越衰老，存在几种使培养中的哺乳动物细胞永生化的方法。近发现的细胞永生化方法是通过端粒酶逆转录酶蛋白（TERT）的表达。它对受端粒长度影响大的细胞特别有用，包​​括许多人类细胞类型。这种蛋白质通常在大多数体细胞中沉默。当外源引入hTERT时，这些细胞能够通过维持足够的端粒长度来避免复制性衰老。

• 概观

用含有hTERT的重组慢病毒感染细胞，用嘌呤霉素筛选产生自己的永生化细胞

• 程序

• 将靶细胞以1-2×10 ^5个细胞/孔的密度铺在6孔板的一个孔中。
• 第二天，将浓缩的重组慢病毒在37℃水浴中解冻，并在解冻时立即将其从浴中取出。
• 在4μlTransPlus试剂（ALSTEM，目录号V050）存在下，用4-20μl/孔上清液感染6孔板中的靶细胞。
  注意：TransPlus试剂是一种聚阳离子，可中和电荷相互作用，从而增加假病毒衣壳与细胞膜之间的结合。
• 第二天，去除病毒上清液并将适当的*生长培养基加入细胞中并在37℃下孵育。
• 孵育72小时后，将细胞继代培养到2×100mm培养皿中并加入适量的嘌呤霉素以稳定细胞系产生。
• 选择后10-15天，挑选克隆进行扩增，筛选阳性克隆。
  注意：解冻后，我们建议不要将上清液再次冷冻以备将来使用，因为病毒滴度会显着下降

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