有关血清的常见问题

有关血清的常见问题

血清是细胞培养中zui重要的元素之一。因此,我们特别整理了一些实验室里常会遇到的问题,供大家参考:

1. 保存血清的方法?

我们建议血清应保存在-5-2O。然而,若存放于4时,请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶,建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。

2. 如何解冻血清才不会使产品质量受损?

我们建议您将血清从冷冻箱取出后,先置于28冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。

3. 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理?

血清中沉淀物的出现有许多种原因,但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量。

若您欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞您的过滤膜。

4. 为什么要热灭活血清?

加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。

5. 有必要做热灭活吗?

实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或*没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是小黑点,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。

因此我们建议您,若非必须,您可以不需要做热处理这一步。如此一来,不但节省您宝贵的时间,更确保血清的质量!

6. 为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀?

胎牛血清没有预老化,储存在28时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在-20储存胎牛血清,避免反复冻融。

7. 如何避免沉淀物的产生?

我们建议您在使用血清的时候,注意下列的操作:

1

解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-204至室温),若血清解冻时改变的温度太大(-2037),实验显示非常容易产生沉淀物。

2

解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。

3

请勿将血清置于37太久。若在37放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。

4

血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。

5

若必须做血清的热灭活,请遵守5630分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。

 

8. Qualified Certified 胎牛血清 有什么差别?

Certified 胎牛血清包括了Qualified胎牛血清执行的所有的标准检验程序,,除了这些标准检测,Certified胎牛血清还有一些附加的检测:

        zui终内毒素含量的检测
        噬菌体检验
        生物化学检测
        激素的检测
        血红蛋白检测
        Sf9 细胞生长促进及方法学检测

9. 如何评估ES细胞合格的胎牛血清?

使用D3 ES细胞。这是一个对于胎牛血清中生长促进、生长抑制和分化因子非常敏感的细胞系。

相关生长效率分析:

ES细胞以非常低的密度传入包含10%胎牛血清的生长培养基中,检测启动和支持ES细胞克隆的能力。

细胞毒分析:

当以非常低的密度传入包含30%胎牛血清的生长培养基中,检测ES细胞和feeder细胞的生长能力。

相关形态学和分化分析:

检测胎牛血清支持未分化ES细胞克隆的能力。通过碱性磷酸酶活性评估分化程度。未分化的ES细胞小颜色深红粉红,分化的细胞较大,丰满,颜色较浅。

所有的分析在没有ESGRO的情况下进行,培养基中出现ESGRO会掩盖由胎牛血清所导致的问题。(ESGROLIF经常用来保持ES细胞处于未分化状态。)

培养发现大约8批血清中有1批可以用来培养ES细胞