缓冲液如何配制

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缓冲液如何配制

1包被缓冲液，

（1）碳酸盐缓冲液（PH9.6 +0.2  0.05M） 《激素酶免疫测定技术》石老师编著

　          Na2CO31.59g

　　　　　　NaHCO3　       2.93g

加蒸馏水至1000ml。

（2）tris缓冲液（0.05mol/L）50ml 0.1mol/L

（Tris）溶液与x ml 0.1mol/L 盐酸混匀后，加水稀释至100ml        《酶免疫测定技术》杨立国等编著

各种pH值的Tris缓冲液的配制　

所需pH值（25℃）

0.1mol/L HCl的体积

7．1

45．7

7．2

44．7

7．3

43．4

7．4

42．0

7．5

40．3

7．6

38．5

7．7

36．6

7．8

34．5

7．9

32．0

8．0

29．2

8. 1

26.2

8.2

22.9

8.3

19.9

8.4

17.2

8.5

14.7

8.6

12.4

8.7

10.3

8.8

8.5

8.9

7.0

某一特定pH值的0.05mol/L Tris缓冲液的配制：将50ml 0.1mol/L Tris碱溶液与上表所示相应体积（单位：ml）的0.1ml/L HCl混合，加水将体积调至100ml

0.1mol/L盐酸的配置：

   买来的浓盐酸是 12 mol/L的，以配制1L 0.1mol/L的盐酸为例：

先用量筒量取8.3 mL的浓盐酸倒入容量瓶，然后将溶液加蒸馏水稀释至体积为1 L，此时的溶液就是0.1mol/L的盐酸。

 

0.1mol/Ltris的配置：0.1 mol/L溶液为12.114 g/L

则 配制600mlTris缓冲液的方法：

         三羟甲基氨基甲烷： 3.6g

         浓盐酸：           2.09ml

 

 

3）0.02mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）

磷酸二氢钾        0.2g

磷酸氢二钠        2.90g

氯化钠            8g

加去离子水定容到1000ml。

2洗涤缓冲液（pH7.4   0.15mol/L）   《激素酶免疫测定技术》石老师编著

0.05%Tween-20       0.5ml

加在PBS缓冲液1000ml中。

PBS缓冲液：

　　　　　　KH2PO4 　　         0.2g

　　　　　　Na2HPO4·12H2O　　  2.9g

　　　　　　NaCl　 　            8.0g

　　　　　　KCl　　             0.2g

　　　　加蒸馏水至1000ml。

3测定缓冲液（Ph7.0  含0.87﹪NaCl 和0.1﹪BSA的0.1M磷酸缓冲液）用于标准孕酮，孕酮酶标物及奶样的稀释。   《激素酶免疫测定技术》石老师编著

        Na2HPO4·12H2O    21.85g

         NaH2PO4·2H2O      6.08g

         NaCl               8.70g

BSA               1.00g

溶于1000mL蒸馏水中

4封闭缓冲液

牛血清白蛋白（BSA）   2%    2g

　　　　　　（或5%脱脂奶粉）加洗涤缓冲液100 ml。

 

 

0.05mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.6）+2.0%BSA

2.0gBSA加配好的0.05mol/L碳酸盐缓冲液溶解定量至100ml

5底物缓冲液（pH5.4）磷酸盐-柠檬酸缓冲液

     0.2M  Na2HPO4（无水28.4g/L，带12结晶水71.7g/L） 取25.7ml

　　 0.1M  柠檬酸（无水19.2g/L，带1结晶水21.01g/L）   取24.3ml

　加蒸馏水至100ml。

 

或

柠檬酸（C6H8O7·H2O）    0.47g

Na2HPO4·12H2O               2.00g

6（1） TMB（四甲基联苯胺）显色液（蓝色）

A液（3，3’，5，5’-四甲基联苯胺，TMB）:称取TMB20mg溶于10ml无水乙醇中，*溶解后，加双蒸水至100ml。

B液（0.1mol/L柠檬酸-0.2mol/L磷酸氢二钠缓冲液，pH5.0-5.4）:称取Na2HPO4·12H2O14.34g，柠檬酸1.87g溶于180ml双蒸水，加0.75%过氧化氢尿素1.28ml，定容至200ml，调pH至5.0-5.4。

将A液和B液按1：l混合后即成TMB-过氧化氢尿素应用液

或

TMB（2mg/ml水）          0.05ml

　　　　    底物缓冲液      　　　   0.95ml

　　　　    30%  H2O2　　 　       0.001ml

            总体积1ml。

（2）OPD（邻苯二胺）显色液（黄棕色）（现配避光）

  OPD（干粉）             0.004g

  底物缓冲液                10ml

  30%  H2O2                    0.015ml

 总体积10ml。

（3）TMBS底物液（用于显色）  《激素酶免疫测定技术》石老师编著

10mg四甲基联苯胺硫酸盐（TMBS）的二甲基亚砜溶液，用底物缓冲液配成0.2mg/ml的TMBS底物液。用前加H2O2溶液30﹪左右。

7  终止液  2mol/LH2SO4   用于终止反应

　在178.3ml水中，逐滴加入浓硫酸（18M，约98%）21.7ml，边加边摇。（浓H2SO4：蒸馏水=1:9）